慢性马兜铃酸肾病动物模型

马兜铃类（aristolochia）植物可引起肾脏的损害。已发现含有中草药的减肥药「苗条丸」可引起慢性肾衰竭，其病理改变是「快速进展性肾间质纤维化」，并将此种肾损害命名为「中草药肾病」（chinese herhsnephrology）。

几年来，有关中草药引起的肾损害问题，已经引起国内外学者的广泛关注。研究发现，引起此种肾损害的中草药的主要成分是马兜铃酸 （aristolochic acidl），其引起的肾损害被称为「马兜铃酸肾病」（aristolochic arid nephrology）。

近年国内文献报道了应用中药马兜铃，关木通引发大鼠急性肾损伤，但慢性马兜铃酸肾病一直未能经动物实验证实。

因此，通过建立慢性马兜铃酸肾病动物模型（animal morlels ofchronic aristolochic aecid nephrology）以便进一步研究马兜铃酸引起肾损害的发生机制与防治措施，具有较重要的理论和实际意义。

实验对象：

① 大鼠。

实验试剂：

① 0.5 mg/mL 马兜铃酸制剂；

② 4% 中性缓冲甲醛液。

(2) 肾组织形态学检查：肾组织标本用 4% 中性缓冲甲醛液固定。石蜡包埋，制成 2 um 厚的切片，分别行 HEPAS，PASM，Masson 染色，做光镜检查。将石蜡包埋标本切成 4 um 厚的切片，消化后免疫荧光检查。肾皮质标本用 3% 戊二醛固定做电镜检查。

肾脏病理图像分析方法：采用 CMIAS 真彩色病理图像分析系统 (北京航空航天大学研制)，通过光学显微镜放大 100~400 倍摄取图像，输入图像分析系统内，进行病理图像分析。

肾小管面积测量：在 100 倍光镜下每个标本随机选取 10 个视野，每个视野测量 5 个近曲小管，测量参数为肾小管面积、肾小管腔面积、肾小管壁面积、肾小管腔面积/肾小管面积比值及肾小管壁面积/肾小管面积比值。

肾间质面积测量：在 400 倍光镜下用 Masson 染色标本测量. 每个标本随机选取 10 个视野，每个视野分别测量肾间质相对面积，即肾间质面积与统计场面积的比值。

1. 血、尿指标的变化情况。实验组用马兜铃酸处理后不同时间点 24 小时尿蛋白定量稍有增加。马兜铃酸组大鼠血尿素氮和血肌酐在用药后 16 周明显升高。停药后这两项指标均未见明显下降，反而继续升高。

2. 肾脏大体标本观察和病理检查结果。两组大鼠肾表面光滑，未见凹凸不平。马兜铃酸组肾皮质在用药 16 周后变薄，肾脏重量明显减轻。

光镜检查发现：马兜铃酸组用药后 8 周，肾脏未见明显损害，只有少数小管上皮细胞发生空泡变性；用药后 12 周，发生空泡变性的肾小管上皮细胞增加，并且有部分肾小管上皮细胞核发生脱落；用药后 16 周，肾脏近曲小管上皮细胞明显肿胀，管腔缩小，并伴有部分肾小管上皮细胞坏死及凋亡；20 周时，肿胀的肾小管上皮细胞逐渐缩小，部分远曲小管出现扩张，但未见间质出现纤维化；24 周时可见较多肾小管出现萎缩，肾间质出现多灶性纤维化。肾小球在用药后 8 周及 12 周基本正常，16 周后肾小球系膜细胞轻度增加；肾血管始终未见明显改变。

免疫荧光检查发现：马兜铃酸的检查结果 lgG，IgA，lgM，C3，Clq 均呈阴性，纤维蛋白原在 16，20，24 周均呈弱阳性反应（±）。

电子显微镜检查发现：马兜铃酸组大鼠用药后 8、12 周初级溶酶体比对照组略有增加，并可见少量次级溶酶体；16 周时初级溶酶体、次级溶酶体明显增加，部分肾小管上皮细胞刷状缘消失；20、24 周时可见胞质内有许多次级溶酶体，并可见髓样小体，部分肾小管上皮细胞刷状缘消失。