丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

慢性马兜铃酸肾病动物模型

相关实验:慢性马兜铃酸肾病动物模型

别名:animal models of puromycin nephropathy

最新修订时间:

简介

马兜铃类(aristolochia)植物可引起肾脏的损害。已发现含有中草药的减肥药「苗条丸」可引起慢性肾衰竭,其病理改变是「快速进展性肾间质纤维化」,并将此种肾损害命名为「中草药肾病」(chinese herhsnephrology)。


几年来,有关中草药引起的肾损害问题,已经引起国内外学者的广泛关注。研究发现,引起此种肾损害的中草药的主要成分是马兜铃酸 (aristolochic acidl),其引起的肾损害被称为「马兜铃酸肾病」(aristolochic arid nephrology)。


近年国内文献报道了应用中药马兜铃,关木通引发大鼠急性肾损伤,但慢性马兜铃酸肾病一直未能经动物实验证实。


因此,通过建立慢性马兜铃酸肾病动物模型(animal morlels ofchronic aristolochic aecid nephrology)以便进一步研究马兜铃酸引起肾损害的发生机制与防治措施,具有较重要的理论和实际意义。

原理

马兜铃酸引起肾损伤的机制包括可诱导肾小管上皮细胞肿大,空泡变性,坏死,脱落,长期用药可导致肾小管萎缩,肾小管转分化以及肾间质纤维化。

用途

慢性马兜铃酸肾病动物模型可以用来研究马兜铃酸的肾毒性及其对其他器官的毒性,也可用于研究慢性肾间质纤维化的发生机制,有助于评价相关中草药的安全性。

材料与仪器

实验对象:


① 大鼠。


实验试剂:


① 0.5 mg/mL 马兜铃酸制剂;


② 4% 中性缓冲甲醛液。

步骤

慢性马兜铃酸肾病动物模型的基本过程可分为如下几步:

A. 实验动物与制剂。

(1) 实验动物:雌性 Wistar 大鼠,20~24 周龄,体重 190-210 g,由中国军事医学科学院动物中心提供。实验期间大鼠自由饮水,摄食,室内温度控制在 20~24 ℃,通风及湿度良好。

(2) 实验试剂:用马兜铃酸标准品(国家卫生和计划生育委员会药品生物制品检定所提供)配制成 0.5 mg/mL 马兜铃酸制剂,高压灭菌,置冰箱 4 ℃ 下保存备用。

B. 造模方法与检测指标。选 Wistar 大鼠 42 只,每只大鼠腹膜内注射马兜铃酸,剂量为 5 mg/(kg·d),共 16 同。在用药开始后第 8、12、16、20、24 周分别处死 6 只大鼠。大鼠在处死时测体重,留取血、尿和肾脏标本,-70 ℃ 冰箱保存,用于做生化及有关病理检查。

(1) 血、尿标本检测:检测项目包括血尿素氮,血清肌酐(自动生化分析仪)。24 小时尿蛋白定量(三氯醋酸比浊法),尿 β2-微球蛋白 ( γ-放射免疫法)。

(2) 肾组织形态学检查:肾组织标本用 4% 中性缓冲甲醛液固定。石蜡包埋,制成 2 um 厚的切片,分别行 HEPAS,PASM,Masson 染色,做光镜检查。将石蜡包埋标本切成 4 um 厚的切片,消化后免疫荧光检查。肾皮质标本用 3% 戊二醛固定做电镜检查。


肾脏病理图像分析方法:采用 CMIAS 真彩色病理图像分析系统 (北京航空航天大学研制),通过光学显微镜放大 100~400 倍摄取图像,输入图像分析系统内,进行病理图像分析。


肾小管面积测量:在 100 倍光镜下每个标本随机选取 10 个视野,每个视野测量 5 个近曲小管,测量参数为肾小管面积、肾小管腔面积、肾小管壁面积、肾小管腔面积/肾小管面积比值及肾小管壁面积/肾小管面积比值。


肾间质面积测量:在 400 倍光镜下用 Masson 染色标本测量. 每个标本随机选取 10 个视野,每个视野分别测量肾间质相对面积,即肾间质面积与统计场面积的比值。

注意事项

1. 血、尿指标的变化情况。实验组用马兜铃酸处理后不同时间点 24 小时尿蛋白定量稍有增加。马兜铃酸组大鼠血尿素氮和血肌酐在用药后 16 周明显升高。停药后这两项指标均未见明显下降,反而继续升高。


2. 肾脏大体标本观察和病理检查结果。两组大鼠肾表面光滑,未见凹凸不平。马兜铃酸组肾皮质在用药 16 周后变薄,肾脏重量明显减轻。


光镜检查发现:马兜铃酸组用药后 8 周,肾脏未见明显损害,只有少数小管上皮细胞发生空泡变性;用药后 12 周,发生空泡变性的肾小管上皮细胞增加,并且有部分肾小管上皮细胞核发生脱落;用药后 16 周,肾脏近曲小管上皮细胞明显肿胀,管腔缩小,并伴有部分肾小管上皮细胞坏死及凋亡;20 周时,肿胀的肾小管上皮细胞逐渐缩小,部分远曲小管出现扩张,但未见间质出现纤维化;24 周时可见较多肾小管出现萎缩,肾间质出现多灶性纤维化。肾小球在用药后 8 周及 12 周基本正常,16 周后肾小球系膜细胞轻度增加;肾血管始终未见明显改变。


免疫荧光检查发现:马兜铃酸的检查结果 lgG,IgA,lgM,C3,Clq 均呈阴性,纤维蛋白原在 16,20,24 周均呈弱阳性反应(±)。


电子显微镜检查发现:马兜铃酸组大鼠用药后 8、12 周初级溶酶体比对照组略有增加,并可见少量次级溶酶体;16 周时初级溶酶体、次级溶酶体明显增加,部分肾小管上皮细胞刷状缘消失;20、24 周时可见胞质内有许多次级溶酶体,并可见髓样小体,部分肾小管上皮细胞刷状缘消失。

来源:丁香实验

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序