简介
链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) 是一种广谱抗生素,具有抗菌、抗肿瘤和致糖尿病的副作用,进入体内通过自由基损伤B 细胞,使B 细胞功能受损,胰岛素合成减少,引发糖尿病。
STZ 是目前使用最广泛的糖尿病动物模型化学诱导剂,它对一些种属的动物胰岛B 细胞有选择的破坏、可以使猴、犬、羊、兔、大鼠、小鼠等实验动物产生糖尿病,常用大鼠造模。
材料与仪器
器材:
全价营养颗粒料和青饲料、注射器、采血针等。
试剂:
步骤
(一)大剂量STZ注射法:
A. 大鼠: Wistar 大鼠禁食10小时,将用STZ 溶于0.1 mol/L 枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液(pH4.5, 4 °C), 配成1.0% 溶液.按50 mg/kg 单次腹腔注射。
5 天后尾静脉血糖≥16.7 mmol/L 为成模标准。朱向红等选用2天龄雄性Wistar 大鼠,STZ 溶于0.1 mol/L 枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液(pH4.4,4 °C) 按90 mg/kg剂量一次性给药,继续饲养至第10 周,成模率约90% 。
B. 小鼠: 6~8 周C57BL/6J 小鼠,禁食12 小时后, 一次性腹腔注射STZ 100 mg/kg (0.1 mol/L 枸橼酸钠稀释,pH4.5), 1周后空腹血糖≥16.7 mmol/L 作为成模标准。用于制备1型糖尿病动物模型。
C. 食蟹猴:雄性成年食蟹猴,禁食16小时后一次性静脉注射STZ( 临用前用0.1 lmmol/L 、pH 4.2-4.5的枸橼酸缓冲液配成10 mg/L), 剂量为45 mg/kg, 继续饲养7 周, 猴糖尿病的诊断标准为:
①空腹血糖≥8.0 mmol/L 且持续3 周以上(空腹指至少8小时未进食);
②葡萄糖耐量试验中,葡萄糖负荷后2小时血糖≥10.9 mmol/L。 具有以上2条之一皆可视为动物已患有糖尿病,同时结合C 肽下降、GAD-Ab 阳性为I型糖尿病模型。
(二)多次小剂量STZ 注射法:
A. Wistar大鼠: STZ 溶于0.1 mol/1. 枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液(pH4.4, 4 °C).配成1.25% 的溶液,按30 mg/kg 剂量给药,每周腹腔注射1次,连续4周,成模率约90% 。用于l 型糖尿病模型制备。
B. SD大鼠:纯种雄性SD大鼠STZ 溶于 0.1 mol/L 枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液(pH4.5, 4 °C),配成2.0% 的溶液,按每日30 mg/kg 腹腔注射,连续3天。
成模判定标准:注射后72小时及1个月末,随机血糖> 16.65 mmol/L, 尿糖强阳性,作为糖尿病鼠建模成功标准。
C. ICR 小鼠:5大龄ICR小鼠,按100 mg/kg 腹腔注射STZ(0.1 mol/L 袧掾酸钠稀释, pH4.5),5 天后再补注STZ 60 mg/kg,, 待小鼠断乳后,给予正常饲料饲养4周后剪鼠尾采血,空腹血糖10~ 1 5 mmol/L 为造模成功。
(三)高脂饲料联合单次小剂量腹腔注射法:
A. SD大鼠:给予高脂饲料(碳水化合物40% ,蛋白质13% ,脂肪40% ,其他7% )饲养4个月后,按30 mg/kg腹腔注射STZ,并继续给予高脂饲料饲养10天。用于2型糖尿病模型制备。
B. Wistar大鼠:给予高脂饲料(配方是在标准全价混合饲料的基础上添加10% 猪油和10% 豆油,热能含量为22.8 kJ/kg),饲养4周后按30 mg/kg腹腔注射STZ,然后继续给予高脂饲料饲养4周。成模判定标准:非空腹血糖>16.7 mmol/L作为成模标准。用于2型糖尿病模型制备。
(四)高脂饲料联合多次小剂量腹腔注射法:
A. Wistar大鼠:给予高脂饲料饲养4周后,按30 mg/kg腹腔注射STZ(每周1次,连续2周),并继续给予高脂饲料饲养至20周。成功率约为75% ,雄性比雌性成功率高。为2型糖尿病模型。
B. 高脂高糖饲料由基础饲料加蔗糖、炼猪油、淀粉等混合而成,总热量为44.3 kJ/kg(蛋白质5% ,碳水化合物60% 其中蔗糖为30% ,脂肪32% 其中炼猪油为30% )。
基础饲料总热量为25 kJ/kg(蛋白质13% 、碳水化合物53% 、脂肪6% )。
来源:丁香实验