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丙氨酸转氨酶活性分析

相关实验:氨基酸代谢产物分析

最新修订时间:

简介

丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)能够催化将氨基从丙氨酸转移到 aα-KG 上的转氨基反应,这个可逆转氨基反应的产物为丙酮酸和谷氨酸,在氨基酸代谢中具有重要作用。哺乳动物肝细胞中 ALT 酶活性很高,当肝细胞坏死,ALT 被释放到血液,血清 ALT 活性显著增高。因此,ALT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

原理

丙氨酸转氨酶活性分析的基本原理是:ALT 催化丙氨酸和α-KG 的转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入 2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在 505 nm 读取吸光度值并计算酶活性。

材料与仪器

① 样品

② 2,4-二硝基苯肼溶液

步骤

丙氨酸转氨酶霍星分析的实验基本步骤如下所示:


A、加入 2,4-二硝基苯肼溶液,终止 ALT 催化丙氨酸和α-KG 的转氨基反应,并且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;


B、苯腙在碱性条件下呈红棕色,在 505 nm 读取吸光度值并计算酶活性。

来源:丁香实验

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