简介
轮状扒拉模型是用分子生物学方法和遗传学原理， 将外源基因重组稳定地整合到动物基因组内， 并能表达和遗传给后代。
用途
1. 利用内源性和各种外源性启动子表达 HPV 全基因组或致癌蛋白到特定组织得到的各种转基因动物， 尽管与临床症状有一定差距， 但对于提示 HPV 致病机制有很大作用。
2. CMV－LoxP－HPV16－LoxP－ECFP 转基因小鼠可探讨整合与游离的 HPV 单拷贝基因组对小鼠的致病性， 可用于 HPV16 的致病机制的研究、新药临床前评价。
材料与仪器
器材：小鼠
步骤
转基因动物模型的基本过程可分为如下几步：
A. 将 HPVI8URR 与 HPV18E6/E7 开放读码框连接进行显微注射。
B. 构建 HPV16 全基因组头尾相连的二聚体， 并将其微注射到 CD－1 小鼠。
C. 利用多种启动子与 HPV 基因连接， 微注射到小鼠体内。如人角蛋白 14（k14） 启动子或 K10 或人外皮蛋白 （human involucrin ，hINV） 或 α－A 晶状体球蛋白启动子与 HPV 基因组相连， 再微注射到遗传背景为 C57 和 BALB/e 的动物体内。
D. 构建 CMV－LoxP－HPV16－LoxP－ECFP 和 Ad－hK14－Cre 序列。利用显微注射技术， 将 CMV－LoxP－HPV16－LoxP－ECFP 序列注人小鼠受精卵雄原核， 然后移入假孕母鼠的输卵管， 自然发育、分娩。取仔鼠尾尖， 进行 PCR 检测， 挑选出转基因阳性小鼠。用 Ac－hK14－Cre 尾静脉注射转基因阳性小鼠并检测。
注意事项
1. HPV 18 E6/E7 基因小鼠 11 个月时， 精囊和包皮出现腺增大，12~24 个月时，40％ e 动物出现宫颈肿瘤。
2. HPV 16 全基因组小鼠在 5 个月时发生皮下间隙， 胸腔和或腹腔发生恶性肿瘤，10～12 个月时死亡。
3. 含启动子的 HPV 转基因小鼠， 在 1～6 个月可定向表达 HPV ， 并引起病变。
4. HPV 可以是整合状态， 也可以是定向游离状态， 并且可以通过绿色荧光观察 HPV 的表达。
来源：丁香实验
