着床前小鼠胚胎的获取与培养

小鼠的发育起始于受精卵的形成，其胚胎发生的早期发育与比其他模式生物慢很多。小鼠胚胎处于2-细胞期在没有明显体积增大的情况下缓慢卵裂，并沿输卵管向子宫移动，直至受精4.5天后植入子宫。

在此过程中，受精卵经桑椹形成（compartion）成为一个实心的细胞球-桑椹胚（morula）。桑椹胚外部形成滋养外胚层（tmphectoderm），未来将分化为胚胎的附属结构如胎盘；内部则形成内部细胞团（inner cell mass，ICM），内部细胞团的一部分发育为胎儿。

在受精后5-10天，3个基本的胚层：外胚层、中胚层和终末内胚层（区别于原始内胚层）通过原肠作用产生，未来小鼠的基本身体结构和器官原基也建立起来。

器材：

③培养箱

试剂：

显微受精技术的基本过程可分为如下几步：

一、着床前小鼠胚胎培养的准备

2. 培养用的培养滴应该在培养前4～6小时或提前1天制作。覆盖液体石蜡有助于培养液稳定并减少蒸发（蒸发可导致渗透压增加），以及减少由培养箱外操作引起的温度和pH变化。一般用20～50 μl培养滴。

3. 对于长期培养箱外操作的实验，或者体外受精，建议维持显微培养滴在37 ℃比较好。用于收集、操作及培养胚胎的培养液都含有抗生素，并经过过滤除菌。

二、胚胎收集

2.合子可以在显微注射前几小时收集。当小鼠饲养在光暗周期的环境下，在中午前收集合子就很方便。在超排的情况下，hCG注射后21～25小时，在交配后第2天清晨检测到阴道栓（0.5 dpc）时收集合子。体外受精时所用的没有受精的、由卵丘细胞包裹的卵子可以同样的方式收集。

3. 2～8细胞阶段的胚胎在输卵管中存在20-60小时时，胚胎已经完全去掉了卵丘细胞，可以用少量的M2培养液将其从输卵管中冲洗出来。

供体雌性小鼠超排之后，2-细胞阶段的胚胎在hCG注射后45-48小时收集（1.5 dpc）；8-细胞到致密化的桑椹胚在hCG注射后67～77小时（2.5 dpe）收集。