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哺乳动物的体外受精

相关实验:哺乳动物的体外受精

别名:in vitro fertilization,IVF

最新修订时间:

简介

体外受精(in vitro fertilization,IVF)是指在体内或者体外成熟的卵母细胞与获能精子,在体外环境中完成受精的技术过程。在生物学中,把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tubeanimal)。这项技术不仅对于配子发育、成熟、受精和早期胚胎细胞分化的研究有理论意义,对于解决人类不孕不育等社会问题也具有重要意义,在生产方面对加速动物的繁衍也具有广泛的实践价值。

原理

体外受精的原理基于卵母细胞与附睾中的精子放入子宫液内进行孵育,可以观察到第二极体释放与卵裂的发生。但是精子只有在雌性生殖道停留一段时间后才具有受精的能力,这种现象被称为精子的「获能」。

用途

体外受精常用于配子发育、成熟、受精和早期胚胎细胞分化的研究、解决人类不孕不育等社会问题、加速动物的繁衍等。

材料与仪器

器材:

① 一次性无菌手套

② 培养箱

③ 注射器


试剂:


① 材料:供体与受体动物

② 成熟培养液

③ 冲洗液:杜氏磷酸缓冲液(PBS)、布林斯特液(Brinster's medium-3)、合成输卵管液(SOF)、惠顿液(Whitten's medium)、海姆液(Ham'sF-10)以及 TCM-199 液

步骤

体外受精的基本过程可分为如下几步:

一、卵母细胞的获取


(1)用注射器抽取有腔卵泡(2~8 mm)内的卵母细胞。

(2)或者用手从直肠把握卵巢,经阴道壁穿刺插入吸卵针,借助 B 型超声波图像引导,吸取大卵泡中的卵母细胞。

(3)卵巢从体内取出后,应及时运输到实验室取卵培养。

二、卵母细胞的体外成熟


(1)由超数排卵采集的卵母细胞已在体内发育成熟,不需培养可直接与精子受精,对未成熟卵母细胞需要在体外培养成熟。

(2)未成熟卵母细胞培养时,先将采集的卵母细胞在实体显微镜经过挑选和洗涤后,然后放入成熟培养液中培养。

(3)卵母细胞移入小滴后,放入二氧化碳培养箱中培养,培养条件为 39 ℃,100% 湿度和 5% 二氧化碳的空气。

三、精子体外获能


咖啡因和肝素的联合使用可大大提高卵的受精率。

四、体外受精或精子显微注射


把卵母细胞均等分配到培养皿的小滴内之后加入精子的悬浮液。

注意事项

(1)卵巢从体内取出后,应及时运输到实验室取卵培养,一般主张在 1~4 小时,如果超过 6~7 小时会显著降低体外成熟率和受精率。卵巢运输保存的温度最好控制在 25~37 ℃,最低不能少于 20 ℃。否则会造成卵母细胞「冷休克」,致使成熟率和受精率下降。

(2)注射法受精跟常规体外受精相比,受精率和发育率都较低。

来源:丁香实验

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