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哺乳动物的胚胎移植

相关实验:哺乳动物的胚胎移植

最新修订时间:

简介

胚胎移植是指将体内发育或体外发育的胚胎移植到同步受体相应部位的过程,这个外来胚胎能够在受体的子宫着床,并继续生长和发育,最后产下正常后代,俗称人工授胎或借腹怀胎,是配子与胚胎生物工程技术的重要基础。利用胚胎移植,可以开发遗传特性优良的母畜繁殖潜力,较快地扩大良种畜群。采用胚胎移植可使牛、马、猪等优良母畜免去了冗长的妊娠期,胚胎取出后不久即可再次发情、配种和受精,从而能在一定时间内产生较多的后代。另外,由于胚胎可长期保存和远途运输,还为家畜基因库的建立、品种资源的引进和交换及减少疾病传播等提供了更好的条件。

原理

胚胎移植的原理基于供体(受孕)与受体(不受孕)的发情同步化,在发情后数日,供体与受体的生殖系统发生的变化是相同的,在相同的一段时期里(相当于周期黄体的寿命)生理状态也是一致的,这为胚胎移植的成功提供了坚实的基础。而胚胎在发育早期着床之前的相当一段时间里是游离于输卵管与子宫腔的,其发育靠本身卵黄提供营养,取出后容易存活,放回后也能继续发育。同一物种之间移植的胚胎没有或者很少发生免疫排斥现象,这使得胚胎在受体里可以存活下来。胚胎必须和受体的子宫内膜建立起生理和组织联系,才能保证未来的发育。

用途

胚胎移植常用于开发遗传特性优良的母畜繁殖潜力,较快地扩大良种畜群、家畜基因库的建立、品种资源的引进和交换及减少疾病传播等。

材料与仪器

器材:

① 一次性无菌手套

② 手术钳

③ 注射器

试剂:

① 材料:供体与受体动物

② 促性腺激素

③ 冲洗液:杜氏磷酸缓冲液(PBS)、布林斯特液(Brinster's medium-3)、合成输卵管液(SOF)、惠顿液(Whitten's medium)、海姆液(Ham'sF-10)以及 TCM-199 液

步骤

胚胎移植的基本过程可分为如下几步:

一、供体与受体动物的准备


(1)选择的供体不仅应该有育种上的价值,而且需要在生殖功能上处于优势的状态,通过人为的超数排卵以及胚胎分割的方法可以提高胚胎的使用率。

(2)受体动物应具有优良的繁殖性能和健康状态,体型中上等。

(3)选择自然发情与供体发情时间相同的母兽,二者发情时间最好不要超过 1 天。

二、超数排卵


在母兽发情周期的适当时间,利用外源性促性腺激素对其卵巢进行处理,诱发其卵巢上大量卵泡同时发育,并排出多个具有受精能力的卵子。

三、同期发情


(1)控制黄体期的时间

(2)使用孕激素(孕酮)及其类似物,使血液中的孕激素或类似物保持一定水平以抑制卵泡发育和母畜发情,人为延长黄体期,推迟发情时间(3)使用前列腺素 F2 及其类似物,溶解黄体降低孕酮水平,人为终止黄体期,促进垂体促性腺激素的释放,从而使母畜提前进入卵泡期排卵发情。

四、供体母兽的配种


经过超排处理的母兽,根据育种的需要,选择优良公兽的精液在适宜时间进行人工授精。为得到较多发育正常的胚胎,应使用活率高、密度大的精液,而且将受精次数增加到 2~3 次,两次间隔 8~10 小时。

五、胚胎收集与检查


(1)用冲洗液将胚胎从生殖道冲出,收集在器皿中。

(2)收集的冲洗液需静置 10 分钟待胚胎下沉再行检查。

(3)用吸管将卵子或胚胎置于新鲜培养液中进行形态观察。

(4)收集到合适的胚胎后,短期使用的可通过体外培养在体温条件下,于培养液中使其继续发育;如需要长期使用则应使用低温保存或冷冻处理,使胚胎停止发育延迟其在体外生存的时间。

六、胚胎移植


胚胎移植要根据动物体内胚胎正常发育的速度和运行位置来确定移植的位置(一般是少于 8- 细胞的胚胎移植到输卵管里)。

来源:丁香实验

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