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TTC 染色法检测心肌梗死

相关实验:心血管系统组织学分析实验

最新修订时间:

简介

对于缺血再灌注或冠脉结扎致心肌梗死的小鼠模型,使用 TCC 染色定义心肌梗死面积。

材料与仪器

器材:解剖工具等。

试剂: 2% 伊文思蓝;2% 红四氮唑(TTC);PBS;4% 多聚甲醛。

步骤

 
1、配制试剂:2% 伊文思蓝(Evans Blue):2 g Evans Blue 粉剂,充分溶解于 PBS 缓冲液,室温避光保存;2% 红四氮唑(TTC):2 g TTC 粉剂,溶解于 PBS 缓冲液,室温避光保存。

2、对于用于检测的心脏,如梗死手术后或体外缺血再灌注的心脏,从主动脉连续灌注 2% 伊文思蓝 3~4 ml,整齐地放在冰冷的铁板上,-20 ℃ 保存过夜。

3、取出冷冻的心脏,在冷冻状态下用预冷的刀片沿左心室长轴将心脏均匀地连续切片,使每片厚 2~3 mm。

4、将切取的心脏厚片置于 2% TTC 溶液中,37 ℃ 孵育 15~30 分钟。

5、取出切片,PBS 漂洗片刻,整理平整后于 4% 甲醛溶液中固定。

6、拍照统计与比较结果。染色后的心肌片正常呈 3 种不同的颜色,蓝色为正常心肌组织,红色为缺血心肌组织,灰白色为坏死心肌组织。通过拍照后统计不同小鼠相同位置切片上不同染色的面积比例,定义心肌梗死程度。

注意事项

1、染色过深或过浅可能和染色时间有关,注意根据情况适当调整染色时间。

2、取材要完整,取材后放低温冰箱速冻以便于后续切片。

来源:丁香实验

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