简介
研究神经元电生理的基础是要获得到好的活体脑片,因此需要使用到振荡切片技术。
材料与仪器
器材:
① 震荡切片机等。
试剂:
① 1%~4% 的低熔点琼脂糖;
② PBS 或生理盐水。
步骤
振荡切片的基本过程可分为如下几步:
A 包埋。使用 1%~4% 的低熔点琼脂糖,用 PBS 或生理盐水配制,浓度根据组织的硬度来自由选择(脑组织软,浓度低一点;心脏硬,浓度高一点),待琼脂糖降温到 37 ℃ 但未凝固时包埋组织,之后等待凝固。
B 修块。将包埋块修正成 8~12 mm 边长的长方体,可略大或略小。
C 固定。用 502 胶水或特制的黏合剂黏合在托上(注意:这里指的不是 PFA 固定,而是将凝胶块固定在托上)。
D 等固定后(约 5 分钟)在槽里灌 PBS 或生理盐水。
E 在槽外灌冰水或放冰。
F 根据实验需要切成 40~400 μm 的任意厚度。
G 捞片。镊子或毛笔挑取。
注意事项
1 振动切片的优势是活体厚片,缺点是需要一定的技术熟练度才能得到比较满意的切片。
来源:丁香实验