简介
卵母细胞冷冻保存技术快速冷冻法,是卵母细胞冷冻保存技术慢速冷冻法的改进。
材料与仪器
器材:
0.25 mL 细管、冷冻仪、液氮罐。
试剂:
① 甘油 ;
② PBS ;
③ PBSS(含 20% NCS 的 PBS)。
步骤
卵母细胞冷冻保存技术快速冷冻法的基本过程可分为如下几步:
A. 冷冻保护剂平衡处理卵母细胞后开始以 1 ℃/min 的速度降温;
B. - 5~- 7 ℃ 植冰;
C. 以 0.1~1.0 ℃/min 的速度降温到 - 80 ℃ 或 - 30~- 40 ℃,投入液氮。
注意事项
降温到 - 30~- 40 ℃ 时投入液氮在牛、人和小鼠的卵母细胞应用较多、效果较好。而降温至 - 80 ℃ 投入液氮的报道很少、效果也不理想,现已基本不用。
解冻一般在室温或 37 ℃ 进行。
来源:丁香实验