简介
卵母细胞冷冻保存技术慢速冷冻法,与胚胎慢速冷冻法相似这种冷冻方法是一种平衡冷冻方法。
材料与仪器
器材:0.25 mL 细管、冷冻仪、液氮罐。
试剂:
① 甘油 ;
② PBS ;
③ PBSS(含 20% NCS 的 PBS)。
步骤
卵母细胞冷冻保存技术慢速冷冻法的基本过程可分为如下几步:
A. 将卵母细胞依次放入含 0. 7 mol/L 甘油的 PBS 和含 1.4 mol/L 甘油的 PBSS 中,分别平衡 7-10 分钟;
B. 然后将卵母细胞装入 0.25 mL 细管的中部,并在细管两端加入冷冻液,每端冷冻液和含有卵母细胞的中间段均用气泡隔开;
C. 将细管放入预先冷却至 -7 °C 的冷冻仪中平衡 10 分钟;
D. 以 0.1~1.0 °C/min 的速度降温到 - 80 °C,停留一段时间后,投入液氮;
E. 解冻时,升温速度低千 25 °C/min。
来源:丁香实验