材料与仪器
器材:
① 注射器
试剂:
① IMDM;
② 1x PBS;
③ 酸化抗生素水。
步骤
骨髓细胞移植实验的基本过程可分为如下几步:
(一)准备骨髓移植受体小鼠
A 受体小鼠在接受辐射 1 周前,要饲喂酸化并添加抗生素的灭菌水。
B 受体小鼠接受辐射后 2 周内要继续饲喂酸化并添加抗生素的灭菌水,然后才可以改喂酸化但不含抗生素的饮用水。
C 对 C57BL6/J 小鼠而言,辐射剂量是 10 Gy 的伽马射线,受体小鼠要在 4 小时内接受尾静脉骨髓移植手术。
(二)准备移植用供体骨髓细胞
A 收获供体小鼠股骨,保存在 RPM11640(2% FBS,10 U/mL 肝素+青霉素+链霉素)。
C 用注射器冲洗股骨骨髓腔,用灭菌的 40 μm 细胞滤器过滤骨髓细胞。
C 用无血清的 RPMI1640 冲洗细胞,4 ℃ 离心 5 分钟,转速 2000 r/mi。
D 用 25 mL 无血清 RPMI 重悬细胞,细胞计数。
E 无血清 RPMI1640 调整细胞浓度至 1x10 cells/mL。
F 对受体小鼠进行尾静脉注射骨髓细胞,每只小鼠注射 0.5 mL 细胞液,即 5x106细胞。
(三)酸化抗生素水制备
A 用 HCl 将水的 pH 调至 2.6,灭菌。
B 每升酸化水加 10 mL 新霉素(10 mg/mL)和 400 μL 硫酸多黏菌素 B(25 mg/mL),过滤灭菌。
来源:丁香实验