用于融合的动物骨髓细胞系

 

四、用于融合的动物骨髓细胞系

淋巴细胞杂交瘤（Lymphocytic Hybridoma）技术需要骨髓细胞系（Myeloma Cell Line）。在淋巴细胞融合技术中，理想的骨髓瘤细胞系应能获得高融合率，并得到产生特异性抗体的杂交瘤。有些骨髓瘤细胞系不仅融合率不高，而且本身分泌免疫球蛋白（Ig），致使杂交瘤细胞仍分泌亲系骨髓瘤的Ig链。据估计，细胞融合时，在两种重链和两种轻链随机组合的情况下，得到的杂交瘤可能产生10种Ig分子，特异性抗体只占其总量的1/16。为了得到只分泌特异性抗体的杂交瘤，需选择本身不产生Ig的骨髓瘤细胞系。其次，适用的骨髓瘤细胞系应对8-氮杂鸟嘌呤（8-azaguanine,8-AG）或6-硫鸟嘌呤（6-thioguanine,6-TG）有抗药性，缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（Hypoxanthineguanine Phosporibosyl Transferase,HGPRT），不能利用外源性次黄嘌呤（H），在含HAT（次黄嘌呤Aypoxanthine，氨基蝶呤Aminopterin，胸腺嘧啶核苷Thymidine）的培育液中死亡。

现已建立的用于B细胞杂交瘤技术的小鼠和大鼠的骨髓细胞系有下列几种

（一）小鼠骨髓瘤细胞系

1．小鼠P3-NS1/1-Ag4-1(1976年kohler)。是常用的骨髓瘤细胞系，来源NS1/1是小鼠骨髓瘤P3（MOPC21）细胞系的亚系，P3细胞分泌IgG1(K)。NS1/1细胞不合成重链（rl），只合成而不分泌轻链（K）.P3-NS1/1-Ag4-1是NS1/1的亚系，抗8-Ag(20μg/ml)，在HAT培养液中死亡。

2．小鼠P3-X63-Ag8。是Kohler和Milstein首次获得产生McAb杂交瘤所用的骨髓瘤细胞系。来源：它来自BALB/c小鼠的P3（MOPC21）骨髓瘤细胞系，分泌IgG1(K),抗8-AG（20μg/ml），在HAT培养液中不生长。

3．小鼠P3-X63-Ag8.653(1979年Kearney)。是P3-X63-Ag8的亚克隆，不可逆地丧失表达免疫球蛋白rl重链和K轻链的能力，其生长特性、融合率及所产生的杂交瘤细胞系的稳定性等方面均可与PS-X63-Ag8或P3-NS1/1-Ag4-1相比拟。

4．小鼠P3-X63-Ag8-U1（1980年Sharon）。是P3-X63-Ag8骨髓瘤细胞系的变系。P3-X63-Ag8分泌重链（rl）和轻链（K），P3-NS1/1-Ag4-1则只合成而不分泌轻链（K）。

5．小鼠SP2/O-Ag14（1978年Shulman）。Kohler等将PS-X63-Ag8骨髓瘤细胞系与具有抗绵羊红细胞活性、产生r2b重链和K轻链的BALB/c小鼠脾细胞融合得到杂交瘤细胞系Sp2/HLGK，从后者得到的Sp2/HL-Ag进行再克隆，得到Sp2-Ag14。它抗8-AG，在HAT培养液中死亡，不分泌Ig链，其细胞含有约73个染色体，比P3-X63-Ag8骨髓瘤细胞系多8个染色体，用其融合得到的杂交瘤数与P3-X63-Ag8相似。

6．小鼠45.6TG1.7（1976年Margulies ）。来源于小鼠MPC-11骨髓瘤，分泌重链（r2b）和轻链（k），抗6-TG（5μg/ml）,在HAT培养液中死亡。

7．小鼠45.6TG1.7.5(1980年Sharon)。是45.6TG1.7骨髓瘤细胞系的亚系。

8．小鼠PuBul-Ou(1976年Kohler)。是分泌IgG2a（k）的骨髓瘤细胞系，对哇巴因（Ouabain）抗药。

（二）大鼠骨髓瘤细胞系

在细胞融合技术中，使用大鼠骨髓瘤细胞系的优点是，从带瘤大鼠得到的血清和腹水量约比小鼠高10倍，适于大量生产McAb或同种异型的抗大鼠抗体。

1．大鼠Y3-Ag1.2.3（1979年Galfre）。Lou系大鼠的骨髓瘤经体外培养获得的细胞系R210，从它得到抗8-AG的亚系210・RCr3.Agl（分泌k轻链），后者经两次克隆，选获Y3-Ag1.2.3。它经5个月连续培养后，与脾细胞的融合率可达到小鼠髓瘤细胞系的水平。在显微镜下，Y3-Ag1.2.3系及其杂交瘤细胞比小鼠P3-X63-Ag8骨髓瘤细胞要小的多。它在OMM培养液（含5%胎牛血清）生长良好，在软琼脂易产生克隆。Y3-Ag1.2.3及其杂交瘤所产生的克隆，细胞分布较分散，不象小鼠×小鼠杂交瘤的克隆细胞密集。用它与DA系大鼠脾细胞融合，获得抗小鼠IgG的大鼠McAb。其杂交瘤YAZ/4OH（LK）细胞接种在（LOU×DA）F1大鼠可以产生肿瘤，带瘤大鼠血清中抗体含量为10～15mg/ml。因此认为210.RCY3-Ag1.2.3是适用于大鼠×大鼠细胞融合的骨髓瘤细胞系。

　　2．大鼠YB2/o（1982和Kilmaruin）。此细胞系不分泌k轻链。将YB2/o及Y3-Ag1.2.3分别与经 酵母 微管蛋白免疫的大鼠脾细胞融合，结果证明两者均适用作细胞融合的亲系，而且YB2/O产生的杂交瘤不分泌骨髓瘤的抗体链。接种杂交瘤的大鼠血清滴度可达1：106。