人体异种移植性肿瘤动物模型的建立

在来自 SPF 级条件下饲养繁殖的 BALB/c 裸小鼠 (T 淋巴细胞缺损) 或 SCID(缺乏 T、B 淋巴细胞，同时存在自然杀伤细胞功能缺陷) 小鼠皮下或原位移植人体肿瘤细胞或组织块，建立人体肿瘤/裸小鼠系统，成为研究人体肿瘤较为理想的模型。

动物模型：

裸鼠

器材：

人肿瘤细胞或组织块等

人体异种移植性肿瘤动物模型根据移植位置分为皮下移植瘤和颅内原位移植两类，具体步骤如下：

（一）皮下移植瘤：

A、在超净工作台内，将对数生长期细胞用 0.25% 胰蛋白酶消化脱壁。

B、用 PBS 以 1000 r/min 离心 10 分钟，洗涤 2 次。

C、台盼蓝染色计数活细胞数，用 PBS 制成一定浓度的细胞悬液。

D、用 1 mL 注射器接种 0.2 mL 瘤细胞液 (含 1×105-1×107 个细胞) 于裸小鼠右 (左) 侧服窝皮下。

E、接种后于 SPF 级环境中饲养定期观察裸鼠精神、饮食排便情况及肿瘤结节大小。

（二）颅内原位移植瘤：

A、以 1% 戊巴比妥钠腹腔麻醉动物，在层流超净台内用鼠脑立体定位仪头架固定裸鼠头部，校正定位仅坐标"0"点。

B、在内毗连线与头矢状中线交汇处行纵向切口约 1 cm，分离暴露颅骨。

C、根据文献报道确定钻孔位置，于冠状缝后 1 mm、矢状线右 2.5 mm 以牙科钻小心钻穿颅骨，深度以达硬膜而不刺破硬膜为准。

D、将吸有 5 μl 瘤细胞悬液的微量进样器固定于立体定向仪横杆上，经钻孔垂直进入脑实质中，进针深度为距颅骨表面 3.5 mm 左右，注射前略微退回 0.5~ 1 mm，将瘤细胞悬液缓慢、匀速注人裸鼠右脑尾状核，除针前停留 2 分钟，缓慢拔针。

E、术后骨蜡封闭骨孔，缝合切口，剩余细胞进行回培养以检测细胞活力及污染与否。

裸小鼠费用昂贵饲养条件和实验条件要求高，使用的笼具、饮水、饲料均需高压灭菌消毒，全部实验过程应达到 SPF 级。