小鼠体内自然杀伤细胞清除

NK 细胞过继回输一般经静脉注射；体内清除则可通过腹腔注射针对 NK 细胞的抗体，如 PK136 单抗、抗 asialo GM1 抗体和抗 Ly49 抗体等，清除 NK 细胞。各种抗体的特异性不同，主要有以下特点：

①PK136 单抗（抗 NK1.1 抗体），特异性清除 NK1.1＊细胞。PK136 单克隆抗体（IgG2a）特异性识别小鼠 NK1.1＋细胞，在小鼠补体存在时，该抗体结合的 NK 细胞能被特异性清除。NK1.1 表达具有种系特异性，仅表达于 C57BL／6、C57BL／10 或 H2b、H2d 和 H2q 同系小鼠，而 BALB／c、AKR、CBA、SJL 及 C3 H 等小鼠不表达 NK1.1。由于 NKT 细胞也表达 NK1.1，因此，应用 PK136 单抗清除 NK 细胞时，同样能够清除 NKT 细胞。

②抗 asialo GM1 抗体，该抗体识别表达在 NK 细胞表面的糖脂唾液酸神经节苷脂 asialo GM1。抗 asialo GM1 抗体能够有效清除小鼠及大鼠体内的 NK 细胞，但大剂量的抗 asialo GM1 抗体也能与小鼠的单核细胞、胚胎胸腺细胞及部分 T 细胞相互作用。因此，在高浓度应用该抗体时，可以删除部分的单核细胞和 T 细胞。

③抗 Ly49 抗体，Ly49 是表达于成熟 NK 细胞上的受体，是成熟 NK 细胞的标志，但 NKT 细胞同样表达 Ly49，因此，应用抗 Ly49 抗体只能清除成熟的 NK 细胞及 Ly49＋NKT 细胞。

自然杀伤细胞清除的基本原理是通过腹腔注射针对 NK 细胞的抗体，如 PK136 单抗、抗 asialo GM1 抗体和抗 Ly49 抗体等，清除 NK 细胞。

试剂：

小鼠（注意上述 PK136 抗体的种系特异性）、PK136 单抗或抗 asialo GM1 抗体或抗 Ly49 抗体、荧光标记的 DX5 单抗（泛 NK 细胞标志）或 NK1.1 抗体。

仪器：

小鼠体内自然杀伤细胞清除的基本过程可分为以下几步：

（1）用 1 mL 注射器吸取 PK136 单抗（200～500 μg／只）、或抗 asialo GM1 抗体（200 μg／只）或抗 Ly49 抗体（10 μg／只），腹腔注射至小鼠体内。同时设立对照组。

（2）分别在注射 1、2 及 3 天后取小鼠外周血 1～2 滴，制备外周血单个核细胞悬液。

（3）以荧光标记的 DX5 单抗或 NK1.1 抗体染色，流式细胞仪检测小鼠体内 NK 细胞清除效果。一般起效时间为 1～3 天。

（1）每一批次的抗体效价可能存在差异，应通过预实验确定抗体有效剂量。

（2）使用的抗体应注意无菌，以避免实验动物的感染。