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骨骼肌细胞的培养实验

相关实验:骨骼肌细胞的培养实验

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简介

骨骼肌细胞的培养实验是指在体外条件下对骨骼肌细胞进行培养。

原理

骨骼肌细胞的培养实验的基本原理是在体外培养时,在培养基中加入胎牛血清并将细胞接种于明胶上,可使肌肉组织中的骨骼肌单核前体细胞在发生增殖的基础上,进一步向成熟骨骼肌细胞发生分化,即细胞间进行大量的融合、细胞内有横纹形成、细胞可发生自发性的收缩等,由此可得到大量的骨骼肌细胞。

材料与仪器

器材:

① 新生 1~2d 的大鼠
② 培养瓶
③ 吸管和胶帽
④ 培养皿
⑤ 解剖剪
⑥ 眼科剪
⑦ 眼科镊
⑧ 无菌的沙网
⑨ 离心机
⑩ 倒置显微镜
⑪ 超净工作台
⑫ CO2 培养箱
⑬ 离心管

试剂:

① D-Hanks 液
② DMEM 培养基(含 10% 胎牛血清)
③ 胶原酶液
④ 0.01% 明胶等。

步骤

骨骼肌细胞的培养实验基本过程可分为以下几步:

(1) 取材

A. 取新生 1~2 d 的大鼠 1 只,采用脱颈椎法将其处死。

B. 用 70% 的乙醇擦拭大鼠全身 3 遍。

C. 在无菌条件下,用解剖剪剪开大腿皮肤,剥去皮毛。

D. 用眼科剪取下大腿肌肉,将其置于盛有 D-Hanks 液的培养皿中。

E. 除去肌肉组织上粘连的脂肪组织,并将肌肉中的骨骼剔除。

F. 将上述肌肉组织用 D-Hanks 液再反复清洗 3 遍,然后置于含用培养基的培养皿中。

(2) 消化

A. 用眼科剪将肌肉组织剪成大小为 1 mm3 的小块,放入盛有胶原酶液(2000 U/ml)的锥形瓶中,于 37 ℃ 消化 24 h 左右。

B. 吸管用力吹打消化后的肌肉组织块,用无菌的沙网将吹打后残余的组织碎块加以滤过,收集细胞悬液于 10 ml 离心管中。

C. 800 r/min 离心 5 min,弃上清。

D. 加入含 10% 胎牛血清的培养基,吹打沉淀的细胞,制备细胞悬液。

E. 将细胞接种于覆盖有 0.01% 明胶的培养皿中,接种量可增大到 2 x 106 个细胞/皿。

F. 将培养皿置于 37 ℃ 培养箱中进行培养,4~5 d 后即可得到大量的骨骼肌细胞。

注意事项

1. 因生长中的肌肉组织中,骨骼肌单核前体细胞数量较多,因此,为提高培养的成功率,培养所用的组织材料应尽量取自动物的幼体或胚胎。

2. 因成肌细胞比非成肌细胞贴壁慢,可采用反复贴壁的方法,减少原代培养中非成肌细胞的污染。

3. 良好的培养条件,如向培养基中加入胎牛血清、将细胞接种于明胶上等,可避免培养的成肌细胞发生去分化的现象,促使其向成熟骨骼肌细胞转变,即:细胞间大量融合形成多核细胞、细胞发生自发性收缩等。

来源:丁香实验

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