动物体内诱生法大量制备单克隆抗体

最新修订时间：2022-02-10

简介

动物体内诱生法大量制备单克隆抗体一般使用 Balb/c 小鼠制备 McAb 或者选用裸鼠制备 McAb。动物体内诱生法又分为实体瘤法和诱生腹水法。

原理

动物体内诱生法的基本原理是因大多数杂交瘤细胞是由 Balb/c 小鼠的骨髓瘤细胞与同一品系鼠的免疫脾细胞融合而来，因此可选用 Balb/c 小鼠制备 McAb。若杂交瘤细胞是由 Balb/e 小鼠的骨髓瘤细胞与其他品系小鼠的免疫脾细胞融合形成，或杂交瘤细胞来源于鼠-人杂交及人-人杂交等，则可选用裸鼠制备 McAb。

材料与仪器

器材：滴管、注射器等。

试剂：

① Pristane（降植烷）或液状石蜡;

步骤

动物体内诱生法大量制备单克隆抗体的基本过程可分为如下几步，本方法以诱生腹水法为例：

A 小鼠需先行预处理，即腹腔注射 0.5 ml Pristane（降植烷）或液状石蜡（经预处理过的小鼠在 2-3 个月内均可使用）。

B 1-2 周后小鼠腹腔注射 1-2x10⁶ 个杂交瘤细胞，细胞接种 7-10 天后可诱生腹水，须密切观察动物的健康状况与腹水征象。

C 待腹水尽可能多、而小鼠濒于死亡之前，处死小鼠，用滴管于腹膜内将腹水吸出，通常一只小鼠可获 1-5 ml 腹水。

D 见小鼠腹部明显膨大，可用 5 ml 注射器（接 8 或 9 号针头）刺入腹腔直接抽取腹水，平均每只小鼠一次可抽腹水 2-3 ml；

E 间隔 2-3 天，待腹水再生积聚后，同法再抽，一般每只小鼠可抽 1-3 次。

注意事项：此外，还可将腹水中的杂交瘤细胞冻存起来，复苏后直接转种于小鼠腹腔则可快速产生大量腹水。

注意事项

1）体内法操作简便，成本较低，所得 McAb 不仅滴度高，而且含量也较高（3-10 mg/ml）；缺点是腹水中常混有来自小鼠的各种杂蛋白（包括其他无关免疫球蛋白），多数情况下需提纯后才能使用，而且存在动物病毒污染的潜在危险。

2）杂交瘤细胞接种量应适当，以每只小鼠 5x10⁵-5x10⁶ 为好，接种细胞过多往往未及收集腹水小鼠即已死亡，或诱发实体瘤无法获得腹水；而接种细胞过少则诱生腹水所需的时间较长。

来源：丁香实验