简介
PAS 法是动物组织内的多糖、黏多糖及黏蛋白常用的显示方法。
原理
PAS 法显示细胞中糖类的基本原理是过碘酸是一种氧化剂，能破坏各种结构内的 C-C键。含乙二醇基（CHOH-CHOH）的糖类在过碘酸的作用下氧化而产生双醛基（CHO-CHO），游离醛基与 Schiff 试剂中的无色品红反应，生成紫红色化合物而附着于含糖的组织上。过碘酸较组织学上常用的氧化 C-C 键的其他试剂（KMnO4、H2CrO4、H2O2）优越，因为它不再进一步氧化所产生的醛基，故醛基可与 Schiff 试剂反应生成紫红色化合物而得到定位。
材料与仪器
器材：
石蜡切片机、显微镜、常规实验器械、动物的肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织。
试剂：
①1％过碘酸
② Schiff 试剂
（碱性品红，1 g ；蒸馏水，200 mL ；1 mol ／ L HCI，20 mL ；偏重亚硫酸钠，1.0 g ；活性炭，2.0 g 。将1 g 碱性品红溶于200 mL 沸蒸馏水中，振荡5 min 使之溶解，冷却至50 ℃ 。过滤，并向滤液中加入20 mL 1 mol ／ L HCl。冷却至25 ℃ ，加入1.0 g 偏重亚硫酸钠，室温下暗处静置24 h 。加入2.0 g 活性炭，振荡1 min 。过滤。置棕色瓶密封，4 ℃ 保存。）
③0.5％偏重亚硫酸钠溶液
（10％偏重亚硫酸钠，5 mL ；1 mol ／ L HCl，5 mL ；蒸馏水，90 mL 。临用前混匀配制）
④乙酸酐-吡啶混合液
（乙酸酐，16 mL ；吡啶（无水），24 mL ）
⑤1％淀粉糖化酶溶液
⑥ Carnoy 固定液
⑦苏木精染色液（苏木精，2.0 g ；95％乙醇，100 mL ；冰醋酸，10 mL ；纯甘油，100 mL ；钾明矾，3.0 g ；蒸馏水，200 mL 。具体配制方法如下：①将苏木精溶于25 mL 95％乙醇及冰醋酸中，然后加入甘油及剩余的乙醇；②钾明矾溶于水中，加热溶解；③把钾明矾溶液缓慢加入苏木精溶液中，边加边搅拌，混合后在光亮处放置3 周 左右；④过滤，备用）
步骤
PAS 法显示细胞中糖类的基本过程可分为如下几步：
（一）组织切片
A．取1～2 mm 厚的肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织块，用 Carnoy 固定液固定，置4 ℃ 冰箱2～4 h 。
B．标本经90％、95％、100％乙醇3次脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。
C．切片脱蜡至蒸馏水。
D．入1％过碘酸水溶液2～5 min 。
E．蒸馏水洗。
F．Schiff 试剂浸泡15 min 。
G．0.5％偏重亚硫酸钠溶液浸泡3 次 ，每次2 min 。
H．流水冲洗5 min ，蒸馏水浸泡1 min 。
I．苏木精复染核。
J．流水冲洗5 min ，过蒸馏水，吸干。
K．95％、100％乙醇脱水各2 次 。
L．二甲苯透明，中性树胶封固。
2．对照片1（用乙酰作用阻断 PAS 反应）
A．于22 ℃ ，将对照片用乙酸酐-吡啶混合液处理1～24 h 。
B．水洗。
C．进行上述之 PAS 反应。
3．对照片2（淀粉糖化酶处理切片）
A．切片脱蜡至水，用1％淀粉糖化酶溶液（pH6.0）37 ℃ 下处理40 min（室温下处理60 min ）；或用唾液处理，室温下60 min（30 min 换1 次 ，共2 次 ）。
B．流水洗5～10 min ，再蒸馏水洗。
C．进行上述之 PAS 反应。
注意事项
1．染色的程度取决于过碘酸处理的时间。因此，切片在过碘酸水溶液中处理时间不宜过长。
2．PAS 反应后，由于过碘酸氧化加速苏木精的染色，其染色时间可适当减少，常用苏木精稀染液复染。
来源：丁香实验
