抗原免疫家兔或小鼠制备多克隆血清

器材：剪刀、镊子、注射器附针头、动物固定架、手术器械、血管夹、黑丝线、塑料放血管、灭菌三角烧瓶（200 ml）、无菌离心管等。

试剂：

①纯化人 IgG（10 mg/ml）；

②灭菌生理盐水；

③弗氏完全（CFA）和弗氏不完全佐剂（IFA）

抗原免疫家兔或小鼠制备多克隆血清的基本过程可分为如下几步，本方法以人 IgG 为抗原，制备家兔抗人 IgG 多克隆抗体

A. 采集对照用正常兔血清 可在免疫前先采集该家兔的正常血清，以备后续研究中作为阴性对照（如抗体效价检测）。一般可通过前述耳缘静脉采血，取血量约 2-5 ml，收集血清。

B. 抗原乳化 取纯化人 IgG 与等体积弗氏完全佐剂（第一次免疫）或弗氏不完全佐剂（后续免疫）混匀，充分乳化以达到「油包水」状态。

C. 免疫初次免疫采用背部皮下多点注射法：于家兔脊柱两旁选 8-12 点皮下注射，每点约 0.05-0.1 ml；间隔 3-4 周后再于上述部位选不同点注射，另加两侧腘窝；一般需连续免疫 3-4 次。最后一次免疫也可无需佐剂，以生理盐水直接稀释抗原后，于耳缘静脉注射免疫。

D. 效价测定 末次免疫后 1 周，从耳缘静脉取血收集血清，以双向琼脂扩散实验或间接 ELISA 法检测抗体效价，同时以免疫前兔血清作阴性对照。

E. 大量采血 当抗体效价满足研究者需求（参考值：双相琼脂扩散实验效价＞1：16；间接 ELISA 效价＞1：6400），即可大量采血，分离纯化抗体。若效价未达到要求，可继续用不加佐剂的抗原（人 IgG）行耳缘静脉内注射免疫，间隔 1 周后再次试血，直至达到要求。

1. 若要获得好的免疫效果，抗原必须经完全弗氏佐剂（CFA）或不完全弗氏佐剂（IFA）充分乳化。但若抗原不纯，佐剂在提高特异性免疫反应的同时，也会辅助抗原中极微量的杂蛋白产生抗体，使免疫血清的纯度受到影响。因此，免疫用抗原最好进行纯化。

2. 注意每次免疫尽可能不要选择与前次免疫相同或邻近的位点，否则容易形成溃疡且难以愈合，特别是弗氏完全佐剂免疫位点。

3. 注意耳缘静脉采血每次取血量不要太多，否则会造成家兔贫血。

4. 免疫后的动物需密切监测其身体的健康状况，若出现超敏反应、皮肤溃烂等问题要及时处理。同时还要加强营养，对家兔，可在饲料喂养的前提下交替辅助给予萝卜或白菜；对小鼠，则给予生瓜子或鸡蛋等，并和实验动物管理人员做好沟通。

5. 实验中应注意遵守实验动物的操作规范，待实验完成后，遵照使动物最小痛苦的原则处死动物。