简介
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。即可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。
材料与仪器
器材:
盖玻片、玻璃虹吸管、显微镜
试剂:
细胞悬液、PBS、0.25% 胰蛋白酶溶液、培养液
步骤
1. 制备细胞悬液
对于悬液培养的细胞,可直接进行下面的步骤 2(计数与计算过程)。如果计数对象为贴壁生长的细胞,首先需将培养物按如下步骤制备成细胞悬液。
(1) 终止培养,将培养液吸出,用 PBS 洗培养物一次;
(2) 给培养瓶内加入 1 mL 0.25% 胰蛋白酶溶液,于 37 ℃ 消化 3~5 min。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时,弃消化液;
(3) 加入一定量的培养液(如果这些培养细胞不再有用,可加 PBS),用吸管吹打,使细胞脱壁而制成细胞悬液。
2. 计数与计算过程
(1) 在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片;
(2) 用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹槽处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止;
(3) 置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数;
(4) 按下式计数细胞悬液的密度:细胞密度 =(4 个大格细胞总数 / 4)× 104 个/mL。
注意事项
三、显微镜下血球计数板如下图:
来源:丁香实验