材料与仪器
细胞
步骤
①细胞在480g的离心力条件下离心10min,弃去上清。
②用冷PBS洗细胞两次,然后将洗过的细胞置于冰上。
③重新悬浮沉淀,使1.0ml裂解液(冷却到4℃)中含大约1X107〜5X107个细胞。
④冰上孵育细胞15min,并不时地振动小管。
⑤4℃条件下20000g离心裂解液10min。
⑥小心地把上清移到另一个小管中,应确保不要碰到沉淀物。将裂解液置于冰上,以备免疫沉淀所用。细胞裂解液可以使用干冰和乙醇的混合物迅速冰冻,-70℃条件下可以长期储存。但是,通过免疫沉淀分离的蛋白复合物的分析,建议使用新制备的细胞裂解液。
常见问题
来源:丁香实验