碱水解和由二吲哚碳酰的活化实验

酶溶液
磷酸钾 NaCl NaOH 二氧杂环乙烷 羰基二咪唑
吸滤器 聚酯小片

实验所需「试剂」具体见「其他」

1. 碱解和活化

聚酯小片（每片 2 cm²，10 片）在 10 ml 10％（质量浓度）NaOH 中室温孵育 10 min。用水冲洗五次，每次 10 ml，之后浸没在二氧杂环乙烷中 30 min，然后用二氧杂环乙烷冲洗五次以去除残留的水。其后，聚酯小片在溶有 35 g/l 羰基二咪唑的二氧杂环乙烷中孵育 30 min。最终用二氧杂环乙烷冲洗五次、用 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸钾冲洗三次。

2. 酶的偶联

聚酯小片浸没在 10 ml 的酶溶液中，在室温过夜孵育，对于敏感的酶在 4℃ 孵育。在吸滤器上先用溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾冲洗，再用 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾冲洗，以去除未结合的酶。聚酯小片能在缓冲液中 4℃下储存一周。为了储存更长时间，必须用水短暂冲洗这些聚酯小片后在空气中干燥（不推荐在敏感的酶中使用）。

试剂：

0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸钾

溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L 磷酸钾，pH7.5

100 g/l NaOH

二氧杂环乙烷

溶有 35 g/l 羰基二咪唑（CDI，Mr＝162.2）的二氧杂环乙烷