原理
D-葡萄糖 ⇌ D-木果糖
材料与仪器
TES NaOH D-葡萄糖 CoCl2 半胱氨酸·HCl 咔唑溶液 硫酸
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
实验步骤与木糖异构酶基本相同,唯一不同的是在酶反应以及加完半胱氨酸后,咔唑和硫酸混合物可以放置 30 min 进行颜色反应,并且在 560 nm 处测吸光值,用 D-果糖准备校对曲线。
常见问题
试剂:
0.2 mol/L TES/NaOH,pH 8.0[N-tris(羟甲基)-甲基-2-氨甲基酸,Mr=229.3;9.2 g 溶于 100 ml 水中,用 1 mol/L NaOH 调节至 pH 8.0,用水加至 200 ml]
2 mol/L D-葡萄糖(Mr=180.2;7.2 g 溶于 20 ml 水中)
0.03 mol/L CoCl2(含六分子水,Mr=237.9;71 mg 溶于 10 ml 水中)
1.5% 半胱氨酸·HCl(半胱氨酸·HCl-水合物,Mr=175.6;溶解 1.5 g 在 100 ml 水中)
0.12% 咔唑溶液(Mr=167.2;120 mg 溶于 100 ml 乙醇中)
70% 硫酸
来源:丁香实验