原理
材料与仪器
酶样品
磷酸钾 NAD+ NADH DTE EDTA DL-硫辛酰胺
分光光度计
磷酸钾 NAD+ NADH DTE EDTA DL-硫辛酰胺
分光光度计
步骤
0.93 ml 实验混合物
0.05 ml 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 10 mol/L
0.02 ml 酶样品
30 ℃ 时,于 340 nm 处吸收值发生变化,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
常见问题
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.5
0.1 mol/L NAD+(游离酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4,71 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L DTE(二硫赤藓糖醇,Mr=154.2;或二硫苏糖醇,DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中)
0.2 mol/L DL-硫辛酰胺(6,8-硫辛酰胺,Mr=205.3;51 mg 分别溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮中)
来源:丁香实验