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二氢硫辛酰胺的氧化反应

相关实验:二氢硫辛酰胺脱氢酶的测定实验

最新修订时间:

原理

此可逆反应可以从任一方向检测。氧化型硫辛酸和其氨基化合物是可以购买到的,但是利用简单的步骤就可使其还原。硫辛酸和其氨基化合物都可作为底物,有氨基存在,此酶的活性要强 5 倍。

材料与仪器

酶样品
磷酸钾 NAD DTE DL-二氢硫辛酰胺
分光光度计

步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.96 ml 实验混合物


0.02 ml 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 4.0 mol/L


0.02 ml 酶样品


开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液


30℃ 时,于 340 nm 处吸收值发生变化,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

常见问题

试剂:


0.1 mol/L 磷酸钾,pH7.5


0.1 mol/L NAD(游离酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中)


0.1 mol/L DTE(二硫赤藓糖醇,Mr=154.2;或二硫苏糖醇,DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)


0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺(Mr=207.3;52 mg 溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮。原料溶液浓度的二氢硫辛酰胺不可溶于水中,而且不可溶于酒精。存在醇脱氢酶时,例如天然的乙醇可以与 NAD 反应形成乙醛和 NADH,因此必须排除这个酶的活性,若两者选一,底物必须溶解于丙酮溶液中)。

来源:丁香实验

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