原理
本实验采用的供体菌是大肠杆菌野生型 Hfr 菌株，对链霉素呈敏感性（Str3），受体菌为大肠杆菌营养块陷型突变体 （Thr-Leu-Thi-），需要苏氨酸，亮氨酸和硫胺素，对链霉索呈抗性 （Str3）。短期接合配对以后，在含有链霉素和硫胺素的基本培养基上只能分离到苏氨酸和亮氨酸的重组子 （Thr＋Leu+Thi-），硫胺素标记位于转移染色体的末端，在短期配对过程中因配对中断难以转移到受体细胞， 因此硫胺素是 Thr＋Leu+Thi- 重组子的必须生长因子。
材料与仪器
大肠杆菌
LB 液体培养基 链霉素硫胺素基本固体培养基平板
无菌试管 1 ml 无菌吸管 盛有 70％ 乙醇的烧杯 玻璃涂拌 振荡混合器
LB 液体培养基 链霉素硫胺素基本固体培养基平板
无菌试管 1 ml 无菌吸管 盛有 70％ 乙醇的烧杯 玻璃涂拌 振荡混合器
步骤
1. 分别将供体菌和受体菌接种在 2 支盛有 5 ml LB 液的试管中。37℃ 振荡培养 12 h。
2. 分别用不同的 1 ml 无菌吸管吸取 0.3 ml 供体菌培养液和 1 ml 受体菌培养液至同一无菌试管中。
受体菌是过量的，这样可以保证毎一个供休菌有相同的机会和受体菌接。
3. 用两只手掌轻轻搓转试管，使试管内供、受体菌混匀。
动作要轻柔，使供体菌和受体菌充分接触，同时避免刚接触的配对又被分开。
4. 将供、受体菌混合培养物置 37℃ 保温 30 min。
5. 3 个链霉索硫胺素固体培养基平板，冷凝后，用玻璃记号笔分别作好标记，2 个平板分别用于供体菌和受体菌作为对照，第 3 个平板用于供、受体菌混合培养物。
6. 吸取 0.1 ml 供体菌放到一个作好标记的对照平板上，用无菌的玻璃涂棒将平板上的供体菌液涂布到整个平板表面，同样吸取 0.1 ml 受体菌涂布到另一个作好标记的对照平板上。
7. 供、受体菌混合培养物保温 30 min 后，将这支试管剧烈振荡。
动作要剧烈，可用振荡混合器振荡几秒钟，使供休菌和受体菌之间的性菌毛断开，从而中止基因的遣传转移。
8. 吸取 0.1 ml 混合培养物，如上述方法涂布到作好标记的平板上。
9. 将所有的平板倒置于 37℃ 培养 48 h。
来源：丁香实验
