超滤法

微型浓缩器初始容量有 2 ml 以及更小的，2 mg/ml 的牛血清蛋白（BSA）样品 2 ml 离心 30 min 可使体积浓缩至 50 ul 以下，然而浓缩的时间依所用超滤膜的类型、缓冲液的组成以及蛋白质的种类和浓度等因素而定。通过向浓缩的蛋白质溶液中加入新缓冲液及再离心，能很方便地更换蛋白质溶液的缓冲液和脱盐，四种型号浓缩器 Centricon-3、10、30 和 Centricon-100 分別能截留平均分子量为 3，10, 30 和 100 kD 的蛋白质组分。

1. 组装 Centricon 微型浓缩器并加 2 ml 样品到样品池内；

图 1 用 Amicon Centricon 浓缩系统浓缩蛋白质溶液

2. 5000 × g 离心 30 min；

3. 去掉样品池的过滤管，盖上回收管；

4. 倒置浓缩器 1000 × g 离心 2 min；

5. 浓缩样品将移入回收管。另外用少量缓冲液洗涤滤器，能较完全地回收蛋白质。

1. 离心时间依样品性质而定。 一般含有甘油的黏性溶液或蛋白质浓度较高时，需要离心时间较长。

2. 在典型的蛋白质回收率可高达 90％ 以上。

3. 目的蛋白的分子置应大于浓缩器截流组分分子量的 30％～50％， 以确保目的蛋白截留成功。

4. 不同的滤膜具有不同的平均孔径，有利于根据蛋白质的大小选择合适的滤膜去浓缩蛋白。

5. Centricon 微量浓缩器的设计适用于固定角度的离心转头。由恰当的离心转头角度，使样品在达到死腔体积为 25～40 ul 时，不进一步浓缩，这样防止了样品被滤干。

6. 其他离心的超滤系统还有 Amicon Centriflo （7 ml 容积）和 Centriprep （15 ml 容积）两种浓缩器。

7. 为了浓缩大体积的样品，采用加压超滤系统耗时较长。Amicon 生产的带搅拌室超滤系统可适用于几百毫升溶液的浓缩。更大体积时则使用螺旋状的、蜂窝状纤维、或盒型膜装置。

8. Penefsky （1977）提出了一种可用于凝胶过滤脱盐的简单离心柱。