多次分离
最新修订时间：
原理
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材料与仪器
多肽：ACTH 4-10
血管紧缩素I和血管紧缩素II 0.05 mmol／L 和 0.25 mmol／L 磷酸钠缓冲液(pH 2.30 存储于 4℃) 0.1 mol／L 氢氧化钠
75 μm 内径的融合硅毛细管柱 CE 仪器 锥形微量瓶
血管紧缩素I和血管紧缩素II 0.05 mmol／L 和 0.25 mmol／L 磷酸钠缓冲液(pH 2.30 存储于 4℃) 0.1 mol／L 氢氧化钠
75 μm 内径的融合硅毛细管柱 CE 仪器 锥形微量瓶
步骤
1. 低压下（0.5 lb/in2）用以下溶液冲洗预处理毛细管：
10 倍柱体积的 0.1 mol/L NaOH
10 倍柱体积的水
4 倍柱体积的 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30。
柱存储于 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30。
2. 将各 0.2 mg 的 ACTH4-10、血管紧缩素 I 和血管紧缩素 II 溶于 1 ml 0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30（终浓度 = 0.6 mg 多肽/ml）制备多肽混合物。冻存 100 μl 每管混合物于 -20℃。
3. 在 0.5 lb/in2，10 s 内用低压注射上样 10～20 nl 多肽混合物。
4. 使用以下条件分离多肽混合物：
电解质：0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30
探测波长：200 nm
温度：25℃
电压：25 kV
分部大小：每收集管 3 min
5. 用一系列的含 10 μl 0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30 的微量锥形瓶替换标准的出口池（正极）。收集 3 min 的组分于每一个瓶子以利于了解分离的长度。
6. 重复注射和分离（步骤 3～5）4 次，合并来自相应的组分号码的内容物。
7. 用以前阐述的分析分离法监视多肽内容的组分（见解析多肽分离实验）。
<link />注意事项
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常见问题
多次收集方法要有效，多肽的洗脱时间必须具有重复性。以下的方法使用P/ACE5000毛细管电泳仪器进行多肽混合物的分离。
<link />来源：丁香实验
