多次分离

1. 低压下（0.5 lb/in²）用以下溶液冲洗预处理毛细管：

10 倍柱体积的 0.1 mol/L NaOH

10 倍柱体积的水

4 倍柱体积的 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30。

柱存储于 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30。

2. 将各 0.2 mg 的 ACTH4-10、血管紧缩素 I 和血管紧缩素 II 溶于 1 ml 0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30（终浓度 = 0.6 mg 多肽/ml）制备多肽混合物。冻存 100 μl 每管混合物于 -20℃。

3. 在 0.5 lb/in²，10 s 内用低压注射上样 10～20 nl 多肽混合物。

4. 使用以下条件分离多肽混合物：

电解质：0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30

探测波长：200 nm

温度：25℃

电压：25 kV

分部大小：每收集管 3 min

5. 用一系列的含 10 μl 0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.30 的微量锥形瓶替换标准的出口池（正极）。收集 3 min 的组分于每一个瓶子以利于了解分离的长度。

6. 重复注射和分离（步骤 3～5）4 次，合并来自相应的组分号码的内容物。

7. 用以前阐述的分析分离法监视多肽内容的组分（见解析多肽分离实验）。

多次收集方法要有效，多肽的洗脱时间必须具有重复性。以下的方法使用P/ACE5000毛细管电泳仪器进行多肽混合物的分离。