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技术和方案23 制备四分体解剖针

相关实验:酵母遗传学方法实验

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材料与仪器

步骤

各种型号的显微操作平台所附带的显微针在四分体解剖、分离合子以及操作单个细胞都十分有用。显微针可以从商业公司购买。或者,将细的玻璃纤维粘在弯的玻璃毛细吸液管上,自己制作显微针,下面介绍两种方法:

方法一:显微针是用直径 2 mm 的玻璃丝在酒精喷灯上拉出来的(Scott and Snow 1978)。针的具体直径要根据实验的具体要求,大直径(100um) 的针比较容易挑取和转移孢子,然而在操作细胞密度比较高的区域是小直径(25um) 的针会比较合适,一般而言直径 50um 的针能满足大多数实验。在拉针时,将玻璃丝置于酒精喷灯的上方直到玻璃棒发热呈橘红色,将玻璃丝拉成合适直径的纤维,然后移出火焰。拉出的玻璃纤维切成约 2 cm 长的片段,并置于预先打湿的玻片上,然后用剃须刀片或玻璃盖玻片切成 1cm 的长度。理想的显微针应该有光滑平整的末端(图 23.1), 可以用显微镜观察直径和末端是否合适。


纤维针的玻璃支持棒是用直径 2 mm 玻璃制作的,100ul 玻璃毛细管正好适合。在距末端 lcm 处加热毛细管,当它变软时,向右弯成直角。在毛细管的末端滴一滴强力胶水,轻轻接触制作好的玻璃纤维,使玻璃纤维正好与毛细管支持棒的轴成直角,并且长度合适。显微针支持棒的长度应该适中,太短针头达不到平板表面。太长则容易扎入琼脂。当胶水干后,将显微针支持棒固定在显微操作平台上。

方法二:这种方法和第一种方法相同,区别在于不是自己制作针头,而是直接购买商品化的玻璃纤维。玻璃纤维剪成片段置于玻片上,然后用前面描述的方法制成末端光滑平整的显微针。和前面方法一样,显微针粘在支持棒上,然后固定在显微操作平台上。

来源:丁香实验

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