基本方案2 重组腺病毒通过耳外静脉注射到兔的肝脏

1.将成年实验兔放置于固定盒内。用浸取了温水的纱布反复擦拭使其耳内血管膨胀。

也可使用 70% 的乙醇。注意其静脉血管位于耳朵外缘，动脉游走于中心。

2.在 5 ml 注射器上装上 21 G 蝶形针头，然后吸入 3 ml 腺病毒悬液，排除注射器内的空气。注射器内含有一定量的空气可使所有的溶液被注射入内。

3.扎入蝶形针头至兔耳静脉，并沿血管行进足够的深度以方便固定针头。开始以 lml/min 的速率注射腺病毒。在蝶形针头内留滞少量的溶液，注意一定不能注射人任何空气。

4.移出针头，然后迅速用纱布垫子压住扎口止血。

5.用凉水轻柔的清洗兔耳。并在兔耳上涂抹少量凡士林。观察兔子 10~15 min，如果兔看起来要昏睡，抚摸它保持其清醒。并立起或移动固定盒。

支持方案 收获肝组织以分析转基因表达

如果转基因编码的蛋白分泌至循环系统，那么其表达可经抽取动物血液并通过对血浆中的蛋白进行免疫杂交（如 CPMB 单元 10.8) 或酶学试验（如 CPMB 单元 11.2) 来验证。对于胞内或膜蛋白，肝组织收获后，转基因表达常应用免疫组化或免疫荧光（如 CPMB 第 14 章)、酶学试验（通常用冰冻切片或石蜡切片）、免疫杂交进行分析。可采用多重时间点来监控转基因表达的水平和持续时间。

1.注射腺病毒后，改善环境以侍养实验鼠或兔 3~5d。用绳带将动物的脚固定至解剖器上，使其腹部朝上，并保持其四肢伸展。

2.用 70% 的乙醇润湿动物腹部的毛发。用镊子夹起其腹部的皮肤并沿中线切割，将其皮肤与腹壁分离。使用镊子提起其腹壁，继续沿中线切割，注意不要损伤其内脏。再在剖面的侧位进行一些切割，然后将其皮肤和腹壁翻折过来。

3.小心的切除肝脏，避免用镊子夹住肝脏组织。将其放置于灭菌的塑胶盘上。用两片干净的刀片将肝组织切碎。保持一把刀片与切割方向一致，然后拖动另一刀片来切割其邻近组织。

4.将肝组织样品按以下一种或多种方法进行保存。

a.石蜡切片。将切割的组织碎片（几毫米）置入福尔马林缓冲液中。包埋前固定过夜或更久。

b.新鲜冰冻切片。切碎的组织放人塑料模具中（对于小鼠肝脏，22 mmX22 mm 大小的模具即可容纳一片大的或两片小的肝组织），然后用 OCT 复合物进行覆盖。在通风橱中放置一个较浅的容器，装入约 1in(约 2.5 cm) 的 2-甲基丁醇以及于冰球或磨碎干冰。当其冷却后，将塑料模具放入容器中，使得 2-甲基丁醇的冷却程度与 OCT 的相当。当完全冰冻后，将样品保存于一 70°C。在低温恒温器中切割前先预冷至一 20°C。

c.RNA 纯化（Northernblot) 或蛋白制样（immunoblots)。应从一些不同的肝叶中切取组织，并放人标记好的冻存管内。投入液氮中，并保存至一 70°C。