材料与仪器
白色的新西兰兔 病毒或非病毒的包含编码重组基因的载体
阿司匹林 氯胺酮 甲苯噻烷 异氣烷 肝素 磷酸盐缓冲溶液
导管（适合兔子用的）和器械 标准的手术器械 2-0和 4-0的丝线 3F 的球囊导管 2-0的缝线 兔子的颈圈 Balfour牵引器 手术刀片 球囊导管 压力计和血压计 5-0的缝线 1-0可吸收的缝线
步骤
1.在手术前 2 天，给白色的新西兰兔按 10mg/kg 体重的剂量服用阿司匹林，并且在整个研究过程中每周一次连续服用 3 次。
2.按每千克 13 mg 氯胺酮和 5 mg 的甲苯噻嗪（xyiazine) 量给兔子进行肌肉注射以麻醉，然后插入一根导管，用 1% 异氟焼（isoflurane) 来麻醉，直到整个手术完成。
3.通过手术使兔子的膝盖以上，股骨以下的部位暴露。把尾部用 2-0 的丝线绑好，就近绑成环状。在丝线节扎出附近的动脉上开一个口子，并且插人一个放了气的 3F 的球囊导管，大概插入 10~15 ml 的深度。
4.给 3F 的球囊导管充气并且慢慢地缩回导管，可以感觉到一些来自导管的阻力。当导管到达所要的动脉切开的位置的时候，放掉导管中的气体，再重复该过程 2 次。最后一次缩回导管的时候，解开先前绑的环。
5.用 2-0PDS 的线将兔子的肌肉和表皮缝合好，为了不让兔子咬掉这些线，在它的脖子上系上颈圈。
6.在手术后，给兔子喂含 0.5% 的胆固醇/2.3% 花生油的兔食，持续 3 周。在兔子喂食的前后测量兔血清中的胆固醇和甘油三酯的含量，预计中喂食前后的胆固醇为（54±4)mg/dl 和（1107±44)mg/dl，甘油三酿为（36±1)mg/d 丨和（218±15)mg/dl0 如第 2 步一样，对兔子进行麻醉，将实验用的兔子准备好，然后用一块布将其盖住，划一条中位线，从它的腹部切开，一直延伸到耻骨。就这样，把猪的表皮和筋膜沿中线切开了。从中打开一个空洞，小心地使用牵引器将它的肠放人体内。
8.用各种各样的器械，将从其头盖骨附近到大腿骨的的动脉血管分离出来。小心地将血管附近的淋巴和附近黏附的组织分开。从水平的角度将血管分离，以避免切到旁边的支血管。
9.小心分离后，用 2-0 的丝线，将分支血管绑好。如果不这样的话，会降低血管中的血压，以至于影响到基因的转移。
10.通过静脉注射，按每公斤 20U 的量，注射肝素。在主动脉的尾部，每一个髂骨血管的分支处和损伤的动脉粥样硬化的尾部绕成环状。暂时牢固地系住主动脉和没受伤的动脉。
11.用手术刀在动脉处切出一个口子，在动脉里插入一个人用血管成形的球囊导管，使其接近动脉粥样硬化的位置（图 13.1.3)，用一根更大的囊球到达一个更加深入的位置。
12.对血管成形的囊球按固定的压力充气 60s。放气并且重复 2 次。每次不同的放气和压力使它进入更深的地方。
13.收缩囊球到一个可以使导管尾部的尖端进入受伤的区域，并且位于體骨的附近便于输入载体。
14.按固定的压力（1~2atm) 给囊球导管充气。暂时将导管固牢。加入 3~5ml 的无菌 PBS，以将血液冲走. 在导管中加入 0.7 ml 的病毒或非病毒的载体液体或者转入基因的细胞混悬液。注意切口尾部的安全。
15.在两个球囊之间（(5.1~0.3 ml) 血管的伤口处的区域滴满悬液，测量滴人时的压力，不要超过 150 mmHg。整个滴人过程为 20 min，其间要控制住压力。
16.先松开远端绳子，然后松开临近的绳子，检查松开之后动脉血的流动是否恢复。如果血流没有恢复，则在没有损伤的髂骨动脉和主动脉注人肝素，然后将一个逆行清除管通过主动脉，从而使在这个上面步骤中形成的血栓破裂被清除。
17.将气导管拿出并结扎，用 5-0 线缝合。用 2-0 线连续缝合腹膜和肌肉。用 2-0 间断缝合线缝合筋膜。用 2-0 简便缝合线缝合皮肤。
来源：丁香实验
