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    基本方案2 基因组 DNA 的扩增

    相关实验：患病个体的序列扩增实验

    最新修订时间：

    材料与仪器

    基因组DNA
    4dNTP 混合物 10 X PCR 扩增缓冲液 寡聚核苷酸引物 Taq DNA 聚合酶 矿物油 筛（子）琼脂糖 DNA 分子大小标准参照物
    聚丙稀微量离心管 循环变温加热器

    步骤

    1.稀释每个D N A 样本到用于分析的lOOng/W ，并 95°C 加热变性5min，于 4°C 储存。 2•对于每个样本而言，在 〇.5m l 微量管中建立如下的50/J 的反应体系： 8jul I.25mmol/L 4dNTP 混合物； I O X P C R 扩增缓冲液； 上下引物各250ng; 200ng D N A 基 因 （ 从第1 步中的样本加斗1); 50pl无菌水。 再加入1.25U Tag D N A 聚合酶。混合，离心，如果是适合加热周期模式，表 面加上矿物油。散在控制反应（ 除了 D N A 的缺失要识别反应）和同步进程。 . 3.取出P C R 使用如下的扩增循环： 30个循环： 30s 94°C (变性） Imin 55°C (退火） Imin 72°C (延伸） 最终步骤： 无定期 4。。 （ 保存） 4.从每一个第二轮反应中，在用E B 染色的琼脂糖凝胶上（ 附录3 G ) 电泳IOjuU 包括 二条含有已知数量的分子大小标准。

    来源：丁香实验

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