免疫荧光和细胞分离

基 本 方 案 1 单细胞表面抗原的免疫荧光标记

材 料

基 本 方 案 2 固定和渗透单细胞的细胞内抗原的免疫荧光标记

材 料

辅 助 方 案 1 用 异 硫 氰 酸 荧 光 黄（FITC) 偶联抗体

材 料

6 . 计算荧光素/蛋 白 质 比（F/P ):
F/P = F I T C 摩尔数/蛋白质摩尔数； F/P = 5 : 1〜6 : 1 最适于流式细胞仪使用。

辅 助 方 案 2 长臂生物素偶联抗体

遵 循 F I T C 偶 联 方 法（见辅助方案 1)，替换以下试剂和步骤见特别说明。
附 加 材 料（其 他 材 料 见 辅 助 方 案 1 ， 带 V 项 目 见 附 录 1)

V 琥珀酰亚胺乙酯标记缓冲液
10m g /m l 长 臂 生 物 素（long-armed Biotin， Z y m e d 公司）溶 于 D M S O ，临用前配制
1 . 用 与 F I T C 偶联相同的方法透析 1〜2m g /m l 的纯化抗体。在透析时，用琥珀酰亚胺
乙 酯 标 记 缓 冲 液 代 替 F I T C 标 记 缓 冲 液 。在 A 28。处 检 测 吸 光 度 ，确 定抗体浓度
( = A ₂₈₀ X 0.74 X 稀释倍数）。
2 . 每毫克抗体加入 IOm I 的 lOmg/m l 用 无 水 D M S O 配制的长臂生物素。室 温 孵 育 lh。
用 与 F I T C 相同的方法去除未结合的生物素（见辅助方案 1)。

备 选 方 案 1 未固定细胞胞内抗原的免疫荧光检测

附 加 材 料

备选方案 2 用 7-氨基放线菌素 D (7-A A D ) 标记死细胞

附 加 材 料