材料与仪器
步骤
基 本 方 案 细 胞 融 合 和 T 细胞杂交瘤的选择
材 料(带 V 项 目 见 附 录 1)
小 鼠(用于体内可溶性蛋白或蛋白肽致敏 T 细胞的制备)
完全弗氏佐剂
反 应 细 胞(未致敏的淋巴结 T 细胞)和用于再次混合淋巴细胞反应中激活 T 细胞
用 的 刺 激 细 胞(表达所需同种异型抗原的脾细胞)
B W 5147 淋 巴 瘤 细 胞 系(A T C C # TIB4 8 , 全 名 为 B W 5147.G .4.1,药物标记,在H A T 培养基中死亡,对 6-硫鸟嘌呤抵抗)
辅助方案 1 筛选表达 C D 3-T C R 原始杂交瘤
在杂交瘤被转移到 2 4 孔 板 后 ,立 即 利 用 一 孔 进 行 初 筛(如 初 筛 C D 3-T C R 的表达)。被选择的细胞株应该通过有限稀释进行克隆和冻存(单 元 1 . 3 , 辅助方案)。
附 加 材 料
辅助方案 2 筛选抗原特异性的杂交瘤
在辅助方案 1 中,只有一部分 C D 3-T C R + 的杂交瘤具有所需的抗原特异性,因此,需要测试候选杂交瘤的抗原特异性,而 不 是 保 存(克隆及冻存)所 有 的 C D 3-T C R + 的杂交瘤。
附 加 材 料
来源:丁香实验