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    夹 心 ELISA 法检测同种型

    最新修订时间：

    材料与仪器

    步骤

    备 选 方 案 4 夹 心 ELISA 法检测同种型 附 加 材 料 （其他材料见基本方案) 抗同种型包被抗体：重 链 特 异 抗 体 （抗 /X、 a、 7 、 S、 e)、重 链 亚 类 特 异 抗 体 （抗 71、 72a、 72b、 73、 7 4 ) 或轻链同种型特异抗体（抗 ； V和 K) (不可结合显色 剂中的抗体） 标 准 同 种 型 抗 体 （如已知同种型纯化抗体） 显色剂：碱性磷酸酶标记抗全部免疫球蛋白重链的特异性抗体 1 . 用 PBSN稀释最适浓度抗同种型抗体，配制 成 2Mg/ml。 筛选杂交瘤上清液的IgG (抗 7)，应最先配制识别所有同种型IgG亚类的包被 抗体，在随后分析中用特异亚类包被抗体。 2•用5〇 4包被抗体溶液包被Immulon微量滴定板的每个孔，并 封 闭 （见基本方案，步 骤 3〜5)0 3 . 配制大约500ng/ml标准同种型抗体溶液作为阳性对照。 4 . 转 移 50M 1的待测样品或标准同种型抗体溶液到抗体包被的孔中。每块板上设阴性对 照 孔 （即未包被待测样本溶液或对照抗体溶液），室 温 下 孵 育 2h 以上，洗 涤 （见基 本方案，步 骤 7)。 5 . 配制显色剂，最终显色剂溶液大约含200ng抗免疫球蛋白/ml。每 孔 中 加 入 50jul碱 性磷酸酶标 记 抗 体 （包括阳性和阴性对照组），室温下孵育2h，洗涤。 6 . 每孔中加入75M1 MUP或 NPP底物溶液，室温下孵育。定时检查滴定板底物显色作 用 （见基本方案，步 骤 9 ; 阳性对照大约lh) ，反应弱的孵育数小时后或过夜再行检 测 。待测溶液需比阴性对照组信号髙出3 倍以上才可定性为阳性。

    来源：丁香实验

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