方案5 用 μLC-ESI-MS/MS 对磷酸化多肽进行分析

IMAC 柱子上洗脱下来的多肽
乙酸 七氯丁酸 乙腈
HPLC 系统 质谱仪 micro-ESI 接口 micro-LC 柱

1.根据制造商的建议，制备、清洗、平衡 uLC 柱。

柱子的流速决定于柱子本身，一般 50um (内径）的柱子为 200nl/min 左右，100um (内径）的柱子则为 500nl/min 左右。通过调节毛细管前方的 T 形分离装置中的毛细管的长度（靠经验确定）进行分流，从而实现对流速的控制。这一装备可用于一般的 HPLC 泵，如能把流速控制在 0.5~4.Oml/min 范围，就可用于毛细管柱的操作。

2.加蛋白质样品（见方案 4 第15 步）到 uLC 柱上。

3.用 0~60% 的线性梯度溶液 B 洗脱，洗脱多肽 50 min 以上，从柱子上洗脱下来的多肽通过 micro-ESI 接口引入 MS。

4.而后对多肽进行 CID 分析，借助 MS 进行片段化选择使用自动化的数据依赖型 MS/MS 程序，该程序在绝大多数 MS 控制软件包中均可选择使用。