原理
利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。为了检测诱导和重组蛋白的表达水平,评估方法的快速简单是很重要的。本方案使用 0.5% TritonX-1OO 裂解细胞,小量制备细菌提取物。
材料与仪器
二硫苏糖醇(DTT) 样品缓冲液 TritonX-100
水浴锅 超声破碎仪
步骤
1.室温离心 1min,从 1ml 培养物中收集细菌。
2.去除上清,用 1ml 预冷的 0.5%(体积分数)TritonX-100 重悬细菌细胞的沉淀物。
3.超声波处理悬浮液,3 个循环,每次 20s。超声间隙把细胞放在冰上冷却。
4.将悬浮液在小型离心机中离心 lmin。
5.在上清液中加入 Lammli 样品缓冲液(含有 100 mmol/L DTT)。混合物煮沸 2 min,用分析级 SDS-PAGE 分析目的蛋白(见方案 1)
来源:丁香实验