材料与仪器
mRNA
甲酰胺 SSPE Denhardt 试剂 SDS
滤膜
甲酰胺 SSPE Denhardt 试剂 SDS
滤膜
步骤
1. 滤膜进行 1~2 小时预杂交。
在 42℃：
50% 甲酰胺
5x SSPE
2 x Denhardt 试剂
0.1% SDS
或者在 68℃：
6x SSC
2x Denhardt 试剂
0.1% SDS
2. 把已变性了的放射性标记探针直接加到预杂交液中。为了探测到低丰度的 mRNA，至少使用 0.1 μg 比活超过 2x108 cpm/μg 的探针。在合适的温度下继续温浴 16~24 小时。
3. 室温下在 1x SSC，0.1% SDS 中洗滤膜 20 分钟，接着在 68℃ 用 0.2x SSC，0.1%SDS 洗滤膜，每次 20 分钟，洗 3 次。
4. 通过使用增感屏，在 -70℃ 用滤膜对 X-射线胶片（Kodak XAR-2 或同类产品）曝光 24~48 小时来制得放射自显影图。
在 42℃：
50% 甲酰胺
5x SSPE
2 x Denhardt 试剂
0.1% SDS
或者在 68℃：
6x SSC
2x Denhardt 试剂
0.1% SDS
2. 把已变性了的放射性标记探针直接加到预杂交液中。为了探测到低丰度的 mRNA，至少使用 0.1 μg 比活超过 2x108 cpm/μg 的探针。在合适的温度下继续温浴 16~24 小时。
3. 室温下在 1x SSC，0.1% SDS 中洗滤膜 20 分钟，接着在 68℃ 用 0.2x SSC，0.1%SDS 洗滤膜，每次 20 分钟，洗 3 次。
4. 通过使用增感屏，在 -70℃ 用滤膜对 X-射线胶片（Kodak XAR-2 或同类产品）曝光 24~48 小时来制得放射自显影图。
来源：丁香实验
