用己二醇法分离中期染色质

细胞
己二醇缓冲液
Dounce 匀浆器

1. 按聚胺法第 1 和 2 步中所述诱导 500 ml 悬浮或单层培养细胞为中期阻遏状态。

2. 细胞在 4℃ 1000 r/min 离心 10 分钟，用 10 ml 培养基重悬浮。

3. 将重悬浮的细胞冷却至 4℃ 放置 20 分钟。

4. 细胞在 4℃ 1000 r/min 离心 4 分钟，取出培养基。

5. 在 4℃ 用己二醇缓冲液清洗细胞，按第 4 步进行离心。

己二醇缓冲液：

1.0 mol/L 己二醇（2-甲基-2，4 戊二醇）

0.5 mmol/L CaCl₂

0.1 mmol/L PIPES，pH 6.5

6. 用 10 ml 冷己二醇缓冲液温和地重悬浮细胞，37℃ 孵育 10 分钟。

7. 缓慢地将细胞悬液通过 25 号针头注射器或用 Dounce 匀浆器匀浆 10 次（避免产生过多气泡）。

8. 染色体悬液粗品用 JA-20 转头（Beclanan J-21 离心机）在 4℃ 5000 r/min 离心 15 分钟进行浓缩。