材料与仪器
TBS
植物凝集素柱
植物凝集素柱
步骤
1. 在含有 Ca2+、Mg2+ 的 TBS 中平衡植物凝集素亲和介质,用至少 20 个柱体积清洗。
2. 在 5 ml —次性塑料吸管或注射器中制备 1 ml 植物凝集素柱。
3. 以缓慢流速(小于 0.25 ml/min)将蛋白样本上柱,回收所有过柱子的流过液。
4. 用 TBS 开始洗柱子,对于 1 ml 柱床体积的柱子,以 1 ml 1份收集流出液, 共收集 10 个 1 ml 流分。
5. 用溶解在 TBS 中的半抗原开始洗脱,对 10 个柱体积来讲,收集 1 个柱体积 1 份的流出液。
6. 如果必要,在 SDS-PAGE 电泳和检测前,用 TCA/DOC 沉淀来浓缩蛋白。
2. 在 5 ml —次性塑料吸管或注射器中制备 1 ml 植物凝集素柱。
3. 以缓慢流速(小于 0.25 ml/min)将蛋白样本上柱,回收所有过柱子的流过液。
4. 用 TBS 开始洗柱子,对于 1 ml 柱床体积的柱子,以 1 ml 1份收集流出液, 共收集 10 个 1 ml 流分。
5. 用溶解在 TBS 中的半抗原开始洗脱,对 10 个柱体积来讲,收集 1 个柱体积 1 份的流出液。
6. 如果必要,在 SDS-PAGE 电泳和检测前,用 TCA/DOC 沉淀来浓缩蛋白。
来源:丁香实验