材料与仪器
细胞
三梨糖醇
PM 或 YE 培养基
三梨糖醇
PM 或 YE 培养基
步骤
1. 用 PM 或 YE 培养基培养细胞，至滴度到每毫升 1X107 个细胞。
2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍，以降低细胞的导电性。
3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞，使滴度为每毫升 1X109 个细胞。
4. 将 1 ng~1 μg DNA 和 0.2 ml 细胞混匀，立即转移到冰冷的电穿孔杯中。
5. 于 2.25 kV、200 Ω、25 μF 对细胞进行电穿孔，立即加入 0.5 ml 冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇。
6. 在非常干的选择性 PM 平板上涂板。
2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍，以降低细胞的导电性。
3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞，使滴度为每毫升 1X109 个细胞。
4. 将 1 ng~1 μg DNA 和 0.2 ml 细胞混匀，立即转移到冰冷的电穿孔杯中。
5. 于 2.25 kV、200 Ω、25 μF 对细胞进行电穿孔，立即加入 0.5 ml 冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇。
6. 在非常干的选择性 PM 平板上涂板。
来源：丁香实验
