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简介
来源:丁香实验
操作方法
1. 在 YEA 平板上培养细胞直到长成可见单菌落。 2. 接种单菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等营养缺陷互补物的 YEA 或 PM 培养基中,于允许温度以 200 r/min 振荡培养防止酵母菌沉积,使细胞滴度达到每毫升 5X106 到 1X107 个细胞。 3. 1000~2000 g 离心 5 分钟,用灭菌蒸馏水洗一遍。 4. 用过滤除菌的 0.1 mol/
非洲粟酒裂殖酵母的电穿孔转化法1. 用 PM 或 YE 培养基培养细胞,至滴度到每毫升 1X107 个细胞。 2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍,以降低细胞的导电性。 3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞,使滴度为每毫升 1X109 个细胞。 4. 将 1 ng~1 μg DNA 和 0.2 ml 细胞混匀,立即转移到冰冷的电穿孔杯中。 5. 于 2.25 kV、200