原理
酵母在琼脂或液体培养基中的理想培养温度是30℃,培养皿平板应倒置放入塑料盒中,于孵箱或培养室内进行培养。当孵育时间超过2或3天时,塑料盒可防止平板上的琼脂干裂。当使用液体培养基培养时,要使用旋转式或往复式摇床,至少每分钟200转,以保证充分通气;进行大体积液体培养时使用锥形瓶,培养基为瓶容积的1/5到1/3。虽然带三重挡板的摇瓶比较昂贵,但每瓶有较多培养基时细胞生长良好。5~10ml的小量培养,可以使用玻璃试管或塑料试管,放入固定于揺床平台上的倾斜支架内,这样可获得最好的通气„ 用灭菌的15mm x 100mm的一次性塑料管进行培养,培养基的量最多为2ml; 而用20mm x 150mm带塑料盖的玻璃管进行培养,培养基的量最大可到10ml。
可用接种环或灭菌的牙签接种平板或液体培养基,一般使用直径为2~3mm的铂或镍接种环。灭菌扁平牙签的大头也可用于酵母细胞的划线接种,以获得单菌落。牙签还可用于重复操作,如多次接种或在方格网上的菌落点斑接种以便进一步的研究等。牙签应宽头朝下放人玻璃样品瓶(24mmx 62mm),用 Morton培养管罩子(直径25mm) 盖上,高压灭菌。
材料与仪器
甘油
YPAD 或 SC 减样选择培养基
步骤
酵母菌株可以用 YPAD 或 SC 减样选择培养基平板于冰箱或冷室中常规保存,当实验需要时应用一个新平板进行划线培养以获得单菌落。
二、长期保存
1. 用 YPAD 或 SC 减样选择培养基平板培养菌株。
2. 用接种环或牙签刮几次细胞,重悬于 20% 的灭菌甘油中,置于微量离心管或冻存管中。
3. 放入 -70℃ 的储存盒中。
4. 从冻存的悬液顶部刮少量样品在 YPAD 平板上划线培养以复苏菌株,培养 2~3 天后分离单菌落用于下一步操作。
来源:丁香实验