材料与仪器
过氧化氢 甲酸
冰 水浴锅
冰 水浴锅
步骤
材料与设备
过氧化氢(新鲜)(30%)
甲酸(可得的最高纯度级)
冰/水浴锅
操作程序
此操作程序系根据 Hirs(1967) 的方法修改而成。
1) 制备过甲酸试剂,将过氧化氢与甲酸以 1:19(v/v) 的比例(比如,0.5 ml 的过氧化氢和 9.5 ml 的甲酸) 混合在一起。室温(25℃) 下, 混合物必须严格地在密闭容器中静置整整 2 h。
2) 过甲酸试剂置冰/水浴中。将待氧化的蛋白质溶解于甲酸(通常浓度为 lmg/ml 时即可满足要求)。再将溶解的蛋白质样品置于冰/水浴中。让蛋白质样品和过甲酸试剂两者同时静置于冰/水浴中 30min,使之均至冰冷。
注:单有冰块不能使试管及冰/水浴锅冷却。
3) 加 2~3 倍(按体积)过量的过甲酸试剂于蛋白质样品。反应混合物在冰/水浴中孵育 2.5 h。
4) 加少量(总体积的 10%) 纯水(去离子水或蒸馏水)于反应混合物,彻底混匀。在真空离心机中挥发除去甲酸、过甲酸和水,至干。将蛋白质样品重溶于水,再用真空离心机重新干燥。
注:从有机酸如甲賅干燥蛋白质样品时,不会以白色或晶状物质出现,而是以透明的"玻璃"状出现。因此,不要期望能很容易地看见试管底部的干燥的蛋白质。如果举灯照射清洁的试管,则可由透射光的变化观察到干燥的蛋白质。
过氧化氢(新鲜)(30%)
甲酸(可得的最高纯度级)
冰/水浴锅
操作程序
此操作程序系根据 Hirs(1967) 的方法修改而成。
1) 制备过甲酸试剂,将过氧化氢与甲酸以 1:19(v/v) 的比例(比如,0.5 ml 的过氧化氢和 9.5 ml 的甲酸) 混合在一起。室温(25℃) 下, 混合物必须严格地在密闭容器中静置整整 2 h。
2) 过甲酸试剂置冰/水浴中。将待氧化的蛋白质溶解于甲酸(通常浓度为 lmg/ml 时即可满足要求)。再将溶解的蛋白质样品置于冰/水浴中。让蛋白质样品和过甲酸试剂两者同时静置于冰/水浴中 30min,使之均至冰冷。
注:单有冰块不能使试管及冰/水浴锅冷却。
3) 加 2~3 倍(按体积)过量的过甲酸试剂于蛋白质样品。反应混合物在冰/水浴中孵育 2.5 h。
4) 加少量(总体积的 10%) 纯水(去离子水或蒸馏水)于反应混合物,彻底混匀。在真空离心机中挥发除去甲酸、过甲酸和水,至干。将蛋白质样品重溶于水,再用真空离心机重新干燥。
注:从有机酸如甲賅干燥蛋白质样品时,不会以白色或晶状物质出现,而是以透明的"玻璃"状出现。因此,不要期望能很容易地看见试管底部的干燥的蛋白质。如果举灯照射清洁的试管,则可由透射光的变化观察到干燥的蛋白质。
来源:丁香实验