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过载染色 SDS 凝胶扫描法估测纯度实验

相关实验:过载染色 SDS 凝胶扫描法估测纯度实验

最新修订时间:

材料与仪器

考马斯亮蓝(CBB) 染色液 脱色液

步骤

试剂

考马斯亮蓝(CBB) 染色液

脱色液

(配方,见“试剂的配制”,PP.184~189)

操作程序

1) 按实验 4(pp.159~160) 所述,取一较纯蛋白质的若干稀释的样品(约含 1、3、10 和 30ug 的总蛋白), 于小型 SDS-聚丙烯酰胺(10%) 凝胶进行电泳、染色和脱色。

2) 对已脱色的凝胶扫描,测定主带(推测是目的蛋白)及各副带(推测是很明显的杂蛋白)中所含染料结合物的量。

3)假定所有蛋白质每微克所结合的 CBB 量都是相同的,据此计算主带和副带的相对量。一些含量甚少的杂蛋白只有在过载的凝胶泳道上才看得见,当总蛋白加样量仅为 1ug 时就看不见。

来源:丁香实验

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