方案11.15 血清的收集与灭菌

收集血液，使其凝固，分离血清。通过孔径逐级减少的过滤器过滤血清。分瓶，包装，冷冻保存。

一、收集

可以从屠宰场收集全血。应直接收集从动物体中流出的血液，收集后妥善放置再分开。或者，在兽医的指导下从活动物身上直接取血。如果选择后一种方法，并用同组动物连续取血，可得到重复性较好的血清，但量很少，花费却很大。如果操作非常仔细，可做到无菌收集。

二、凝固

将血液放在密闭容器中，4°C 过夜，可形成凝块，这被称作自然凝固血清，它比通过离心和脱纤维蛋白等物理方法分离血细胞要好，因为在形成凝块的过程中，血小板会释放生长因子到血清中。将血清与凝块分离，然后将血清以 2000 g 离心 1 h ，弃去沉淀。

三、灭菌

血清通常用 0.1 μm 孔径的无菌过滤器进行过滤，但由于它的黏度和颗粒含量都很高，所以在进行最后的无菌过滤前，要经过一系列玻璃纤维或其他预过滤过程。只有最后的过滤要求是无菌的，用 142~350 mm 内嵌式碟状过滤器或相似的一次性过滤器（如 M illipak 200）。预过滤装置可以是装有可更换滤筒的不锈钢滤器、碟状过滤器或单一的黏合过滤器（Pall Gelman)。最后一种操作非常容易，但清洗和再次应用则非常困难。

无菌过滤器 无菌接受瓶 无菌瓶子 容器 蠕动泵 架子

1. 在非无菌过滤装置（一次性玻璃纤维过滤器或 142 mm 可重复使用过滤器（如Pall Gelman)； 5 μm 孔径的一次性或可重复使用过滤器（如PallGelman Verapore )；1.2 μm孔径的一次性或可重复使用过滤器（如Millipore Opticap )；0.45 μm 孔径的一次性或可重复使用过滤器（如Millipore Millipak )）中插入合适的非无菌过滤膜（如果所采用的是可重复使用的装置）。

2. 连接一个或多个预过滤器（200 mm，0.1 μm 孔径的过滤器（如 Millipak ，Millipore )。0.2 μm的孔径可有效地去除细菌和真菌，但是 0.1 μm 的孔径可用于去除支原体），最后为一次性无菌过滤装置或可重复使用的装有 0.1 μm 孔径滤膜的滤器，该滤器经蠕动泵与无菌接受容器（底部有出口的无菌接受瓶）相连。

3. 将泵的接口放到血清容器（用于无菌检测的普通容器）中。

4. 打开泵，当泵湿了以后检查可重复使用的过滤装置是否有裂口；关闭泵，如果需要可将过滤架拧紧。

5. 再次打开泵继续过滤，检査是否有渗漏或堵塞。提高流速可增加过滤的速度，但可能会导致过滤器堵塞。

6. 平均收集到无菌瓶（盖着盖子、铝箔包裹的无菌瓶子）中，至少留出 20 % 的上部空间以备冷冻时的热膨胀。

7. 在整个过程的开始、中间和最后阶段收集样品进行无菌检测。

8. 将瓶子盖好，做好标记，编号。

9. 将铝箔重新包裹瓶盖，包到瓶颈以利于保存。

10. -20°C 保存，直到完成质量控制。

前面所述的只是一个例子，其实可以与供应商联系得到一系列适合于自己血清的过滤器和预过滤器。如果只用一次，可采用一次性过滤器；如果是经常性地重复收集，则在预过滤时使用可重复使用的过滤器较为经济， 在无菌过滤时仍然使用一次性过滤器可增加安全性。

适合于体积 5~20 L 的灭菌材料