原理
检査配方设计：如果配方完全，在加完血清之后可直接使用；如果配方不全（例如，缺少谷氨酰胺），则加人相应的浓缩液。
材料与仪器
培养基储存液 谷氨酰胺 血清 抗生素 青霉素 链霉素
吸液管
吸液管
步骤
1. 检查培养基的配方，并决定需要添加何种添加剂，例如谷氨酰胺。
2. 将培养基放在超净台内，如果需要可加入其他补充物或添加剂。
3 . 如果瓶盖用聚乙烯封口，去掉聚乙烯，用 70 % 的乙醇擦洗。
4. 将瓶子打开。
5. 将各种适量的添加剂加到瓶中，并做正确稀释；如果配制 100 ml，按下列配方：
谷氨酰胺，200 mmol/L，1 ml
抗生素（如果需要使用），0.5 ml (每种各取)
血清，10 ml (10%)
(a) 每一种添加剂均用不同的移液管。
(b)加完一种添加剂后将其移到超净台的一侧，这样就知道已经加了哪种添加剂。
(c)培养基配完后，将所有的添加剂和补充物从超净台上拿走。
6. 此方案特别针对以 Hank’s 盐溶液配制的 MEM ，这种培养基含低浓度的碳酸氢钠（4 mmol/L )。如果是使用以 Earle’s 盐溶液配制的 MEM 或其他高碳酸盐浓度的培养基（23 mmol/L ) , 配制后要充人 5% 的 CO2 气体。不要向含有血清的培养基中直接充气，因为培养基起泡将从瓶颈处溢出，污染的危险性增大。
7. 将瓶子盖好。
8 . 更改标签，记录添加剂、日期并签名。
9. 将培养基保存在 4°C 或直接使用。
10. 如果是第一次使用一种新的培养基，要吸出一些放在培养瓶或培养皿中，在标准条件下培养至少 1h （最好过夜），确认 pH 处于正确的水平。如果不是，调整培养基 PH ，重复上述过程，或者改变 CO2 的浓度。
2. 将培养基放在超净台内，如果需要可加入其他补充物或添加剂。
3 . 如果瓶盖用聚乙烯封口，去掉聚乙烯，用 70 % 的乙醇擦洗。
4. 将瓶子打开。
5. 将各种适量的添加剂加到瓶中，并做正确稀释；如果配制 100 ml，按下列配方：
谷氨酰胺，200 mmol/L，1 ml
抗生素（如果需要使用），0.5 ml (每种各取)
血清，10 ml (10%)
(a) 每一种添加剂均用不同的移液管。
(b)加完一种添加剂后将其移到超净台的一侧，这样就知道已经加了哪种添加剂。
(c)培养基配完后，将所有的添加剂和补充物从超净台上拿走。
6. 此方案特别针对以 Hank’s 盐溶液配制的 MEM ，这种培养基含低浓度的碳酸氢钠（4 mmol/L )。如果是使用以 Earle’s 盐溶液配制的 MEM 或其他高碳酸盐浓度的培养基（23 mmol/L ) , 配制后要充人 5% 的 CO2 气体。不要向含有血清的培养基中直接充气，因为培养基起泡将从瓶颈处溢出，污染的危险性增大。
7. 将瓶子盖好。
8 . 更改标签，记录添加剂、日期并签名。
9. 将培养基保存在 4°C 或直接使用。
10. 如果是第一次使用一种新的培养基，要吸出一些放在培养瓶或培养皿中，在标准条件下培养至少 1h （最好过夜），确认 pH 处于正确的水平。如果不是，调整培养基 PH ，重复上述过程，或者改变 CO2 的浓度。
注意事项
1. 加入培养基的补充成分（比如， 血清或抗生素）并不包含在最初的配方中。这必须在发表文章时有简要的说明， 其他加入的添加剂（例如， 谷氨酰胺或NaHCO3是配方的一部分， 而不是补充物。它们不需要在发表文章时进行说明， 除非浓度有变化。
2. 改变温箱的 CO2 浓度也会影响温箱中其他的培养基。改变 CO2 的浓度应被视为一次性地调整， 不应该用于调整批间的变化，批间的变化最好通过加无菌的酸或碱来调整。
2. 改变温箱的 CO2 浓度也会影响温箱中其他的培养基。改变 CO2 的浓度应被视为一次性地调整， 不应该用于调整批间的变化，批间的变化最好通过加无菌的酸或碱来调整。
常见问题
用10X 浓缩液配制培养基是一种折中的好方法，其经济性和便捷性介于使用以干粉配制培养基和使用1X 工作液 之间。方案11. 8 的设计可与练习10相结合。
来源：丁香实验
