方案25.1 器官培养实验

取出器官或组织，将其切成 1 mm³ 小块或成薄膜状、杆状。然后，将组织放在位于气液界面的支持物上，如滤膜培养皿。在湿润的 CO₂ 培养箱中培养，根据需要更换培养液。

M199
解剖器械 滤膜培养皿 12 孔培养板 受精鸡蛋

一、材料

无菌 

1. 解剖器械 

2. 含有或不含有血清的培养液（如 M199）

3. 非组织培养处理的滤膜培养皿（如 Costar Transwell 聚碳酸酯，#3423，Corning）

4. 12 孔的培养板（Corning）

非灭菌 

1. 已受精的鸡蛋，孵育 8 d

二、操作步骤

1. 将滤膜培养皿放在多孔培养板的各个孔内，加入培养液直至达到滤膜底面水平（约 1 ml）。

2. 将多孔培养板放入湿润的 37°C 恒温 CO₂ 培养箱中，以调整培养液的 pH。

3. 准备组织或切出整个胚胎器官（如 8 d 鸡胚的股骨或胫骨；见方案 12.2 和方案 12.7）。在一个纬度，组织厚度必须不超过 1 mm，最好更小（如 8 d 胚的胫骨长度可能达 5 mm，但直径仅 0.5~0.8 mm。皮肤小块可为 10 mm²，但厚度仅为 200 μm。必须切成小块的组织不应大于 1 mm³，如肝或肾）。

4. 在短时间内解剖标本（＜ 1 h），HBSS 要充足。但是，较长时间解剖时应在以 HEPES 缓冲为 pH7.4 的 HBSS 中添加 50% 血清。

5. 从培养箱中取出多孔板，小心地将组织转移到滤膜上。这一步最好用 Pasteur 吸管完成，可同时吸出随组织块转移出的液体，应小心不要刺破滤膜。在吸取前，先用培养液湿润吸管内壁，以防止吸取时组织块黏到吸管壁上。

6. 检查培养液的水平，确认将组织浸湿，但没有完全浸没。然后，将培养板放回培养箱中。

7. 2~4 h 后再次检查，确保培养液面保持在滤膜和组织块之上，但深度不足以使组织块浮起。

8. 将组织培养 1~3 周，根据样本需要，每隔 2~3 d 更换培养液 1 次。