方案24.2 冻存活检组织实验

切取肿瘤，将肿瘤块浸于 DMSO，然后分量冻存于液氮中。

活检标本
DBBS 收集液 二甲基亚砜
塑料冻存管 解剖刀 解剖镊 培养皿

一、材料

无菌

1. 活检标本

2. 1.2 ml 塑料冻存管（Nagle Nunc）

3. DBBS

4. 收集液

5. 二甲基亚砜（如果放在一个无菌容器中，为半灭菌的）

6. 器皿（解剖刀、解剖镊、培养皿等，同为原代培养）

二、操作步骤
1. 除去坏死组织、脂肪和纤维组织后，将肿瘤切成约 1~2 mm 的小块。同原代培养，将肿瘤块放入 DBBS 中浸洗。

2. 在每个冻存管中放入 4 或 5 个肿瘤块。

3. 将 1 ml 含有 10%DMSO 的生长培养液加入到放有肿瘤块的冻存管中，在室温下放置 30 min。

4. 将冻存管按 1°C/min 冷冻（见方案 20.1），然后将冻存管移入液氮罐。为了避免爆炸危险，不要将冻存管浸入液氮。

5. 将冻存管放在 37°C 温水中，使其融化（要有适当的预防措施，见方案 20.2）。

6. 用乙醇将冻存管彻底擦拭后打开，使肿瘤块沉淀后，吸出一半培养液。

7. 缓慢补充不含 DMSO 的新鲜培养液，轻轻摇动混合后，放置 5 min。

8. 用不含 DMSO 的培养液逐渐置换全部的培养液，然后将肿瘤块移入 Petri 培养皿，按常规原代培养方法进行操作，但每培养瓶中放入两倍多细胞。