方案21.9 悬浮培养细胞生长曲线的绘制

以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养，每天计数细胞直至平台期。

材料

无菌

悬浮细胞培养
培养液，l00 ml
D-PBSA(细胞计数用）
24 孔板

非无菌

装培养板的塑料盒
CO₂ 温箱或 5% C0₂ 以充盈塑料盒

操作步骤

1. 如单层培养那样（见方案 21.8 ) 将生长液中的细胞悬液以不同浓度加人到孔中。

2 . 以不同时间从三孔中取样 0.4 ml，注意细胞要充满混匀以及完全分散成单个。

3. 用电子细胞计数器汁数（见 21.1.2 节）或用血球计数器计数（见 21.1.1 节)。

4 . 计算每个样本的细胞浓度，像单层细胞生长一样以时间作对数线性作图（见 21.9.3 节）。细胞密度不适用于悬浮培养，因为它们不会贴附。

提示 接种 2 个 75 cm² 培养瓶，每瓶 20 ml 不同农度的细胞悬液。按需要每天从瓶中取 0.4 ml，但取样前要混匀细胞。培养瓶离开温箱的时间要尽量短，在画生长曲线期间不要换培 养液。或者将培养瓶装在振荡器上（Techne，Integra，BeHco)，每天取样。如果用振荡培养瓶在一侧瓶口封膜，则不用从温室中取出培养瓶， 也不用打开封口膜就可以取样，将膜面擦净，颠倒一下瓶子用注射器就可将液体吸出。